实训项目-高密度脂蛋白胆固醇.docVIP

实验 高密度脂蛋白胆固醇测定 HDL-Cholesterol Kit（HDL-C） 磷钨酸-镁沉淀法 通用型（干粉） 用途： 本试剂用于测定人血清中高密度脂蛋白胆固醇的浓度。 测定原理： 血清中低密度脂蛋白（LDL）及极低密度脂蛋白（VLDL）经磷钨酸镁沉淀后，上清液为高密度脂蛋白（HDL），其胆固醇含量用酶法测定，原理如下： CEH 胆固醇酯+H2O 胆固醇+游离脂肪酸 CHOD 胆固醇+O2 △4-胆甾烯酮+H2O2 POD 2H2O2+4-氨基安替吡啉+4-氯酚 醌亚胺+4H2O 试剂盒主要成分与浓度： 试 剂 主 要 成 分 实验浓度 R1 胆固醇酯酶（CEH） 胆固醇氧化酶（CHOD）过氧化物酶(POD) ≥1140U/L ≥800U/L ≥6000U/L R2 磷酸缓冲液（pH7.7） 4-氯酚 4-氨基安替吡啉 100mmol/L 3.5mmol/L 0.5mmol/L R3 磷钨酸 氯化镁 HDL-C定值血清标准 （标签注明） 试剂稳定性： 原装试剂在2~8℃避光保存，有效期12个月。 2~8℃保存稳定1个月，在15~25℃保存稳定3天，沉淀剂R3可长期稳定。 样品： 新鲜无溶血血清，肝素或EDTA抗凝血浆。 波长：500nm (480nm~520nm) 反应温度：37℃ 比色杯光径：1cm 将血清与沉淀剂R3以1：1混合，室温放置10分钟后，3000转/分离心15分钟，取上清液作胆固醇测定，必须在4小时内完成。 取一定量R2（参看R1瓶签）复溶1瓶R1,溶解后即为工作液。 空白管 标准管 样品管 工作液 1.0ml 1.0ml 1.0ml 蒸馏水 25μl — — 定值血清 — 25μl — 上清液 — — 25μl 分别混合均匀，在37℃ 保温6分钟，以试剂空白管校零，读A标准及A样品。 计算： A样品 HDL-C的浓度= ×标准浓度（mmol/L或mg/dl）×2* A标准 *为血清稀释倍数 参考值： 男：成人 1.16~1.42mmol/L (45~55mg/dl) 女：成人 1.29~1.55mmol/L (50~60mg/dl) 0.90mmol/L(35mg/dl)以下为明显偏低 线性上限： HDL-C浓度可达3.1mmol/L(120mg/dl） 正常胎牛血清中含胆固醇33mg/100ml 沉淀后的上清液必须清晰，在血清严重混浊时，LDL，VLDL不易沉淀完全而致上清液稍浑，可用生理盐水1：1稀释后重新测定。结果乘以2。 2.甘油三酯过高可使上清液混浊，其他影响测定的因素有溶血、黄疸、抗坏血酸等。 3. 试剂应在2~8℃条件下贮存，避免在2~8℃以上及0℃以下存放。