持续Wnt信号通路激活促进胚胎干细胞源造血干细胞地增殖.docVIP

持续Wnt信号通路激活促进胚胎干细胞源造血干细胞的增殖 林?芳1，2，金静君2，张?韬2，纪斌峰1，陈?泳2，3 1福州大学生物科学与工程学院，福建省福州市?350108；2福建省医学科学研究院、福建省医学测试重点实验室，福建省福州市?350001；3福建师范大学生命科学学院，福建省福州市?350108 Proliferation of hematopoietic stem cells differentiated from embryonic stem cells?via?sustained Wnt pathway activation Lin Fang1, 2, Jin Jing-jun2, Zhang Tao2, Ji Bin-feng1, Chen Yong2, 3 1School of Bioscience and Engineering, Fuzhou University, Fuzhou 350108, Fujian Province, China;?2Fujian Academy of Medical Sciences, Fuzhou 350001, Fujian Province, China;?3School of Life Science, Fujian Normal University, Fuzhou 350108, Fujian Province, China 摘要? 背景：如何提高胚胎干细胞诱导效率、促进胚胎干细胞源造血干细胞体外增殖成为目前急需解决的课题。 目的：以外源性Wnt3a作为诱导剂，激活培养中的小鼠胚胎干细胞Wnt/β-catenin信号通路，观察该通路的激活是否促进胚胎干细胞向造血祖细胞的定向分化。 方法：用外源性wnt3a(100 μg/L)持续作用ES-E14TG2a小鼠胚胎干细胞21 d，通过细胞免疫荧光及蛋白免疫印迹检测细胞内β-catenin蛋白含量，QRT-PCR检测Wnt下游靶标基因的表达量来确定经典Wnt/β-catenin信号通路是否被激活，然后采用单层贴壁培养法诱导其向造血干细胞分化，流式细胞仪检测造血发育相关表面标志CD34+/Sca-1+，同时以QRT-PCR法检测造血相关基因的表达情况。 结果与结论：ES-E14TG2a小鼠胚胎干细胞经wnt3a(100 μg/L)连续培养21 d后发现β-catenin蛋白在细胞内积累；Wnt信号通路的下游靶标基因Pitx2、Frizzled、Sox17、Oct4的表达量均出现不同程度的增加，可见经典Wnt/β-catenin信号通路有被激活；单层贴壁培养法诱导其向造血干细胞分化的过程中检测到CD34+/Sca-1+细胞含量在14 d时占总细胞量高达20.2%，而对照组的仅占11.9%。造血相关基因骨形态发生蛋白4、FLK2及CD34的表达量均增加，而Smad5的表达则明显受到抑制。说明Wnt3a持续作用可激活Wnt/β-catenin信号通路，并促进ES-E14TG2a小鼠胚胎干细胞向造血干细胞的定向分化。 中国组织工程研究杂志出版内容重点：干细胞；骨髓干细胞；造血干细胞；脂肪干细胞；肿瘤干细胞；胚胎干细胞；脐带脐血干细胞；干细胞诱导；干细胞分化；组织工程 全文链接： 关键词?：?干细胞；?胚胎干细胞；?造血干细胞；?Wnt3a；?Wnt/β-catenin信号通路；?福建省自然科学基金； ?? Abstract： BACKGROUND:A variety of embryonic stem cells induction and differentiation systems have been established so far, while the research that promotes embryonic stem cells to differentiate into hematopoietic stem cells is still at an initial stage, and the induction efficiency needs to be improved. OBJECTIVE:?To active the Wnt/β-catenin signal pathway in mouse embryonic stem cells with exogenous win3a as an inducer, and then to observe whether the activation of this pathway will promote the directional differentiation of embryonic stem cells into hemat