第二章菌种与种子扩大培养.pptVIP

第二章 菌种与种子扩大培养 本章讲述内容 第一节 微生物工业用菌种 第二节 种子扩大培养 第一节 微生物工业用菌种 一、菌种的分离筛选 1、菌种的来源 根据资料直接向有科研单位、高等院校、工厂或菌种保藏部门索取或购买； 从大自然中分离筛选新的微生物菌种。 2、分离思路 新菌种的分离是要从混杂的各类微生物中依照生产的要求、菌种的特性，采用各种筛选方法，快速、准确地把所需要的菌种挑选出来。 实验室或生产用菌种若不慎污染了杂菌，也必须重新进行分离纯化。 有了优良的菌种，还要有合适的工艺条件和合理先进的设备与之配合。 定方案：首先要查阅资料，了解所需菌种的生长培养特性。 采样：有针对性地采集样品。 增殖：人为地通过控制养分或培条件，使所需菌种增殖培养后，在数量上占优势。 分离筛选：采用选择性培养基利用分离技术得到纯种目的菌。 发酵性能测定：进行生产性能测定。这些特性包括形态、培养特征、营养要求、生理生化特性、发酵周期、产品品种和产量、耐受最高温度、生长和发酵最适温度、最适pH值、提取工艺等。 （1）采样 采样对象：以采集土壤为主。 采样季节：以温度适中，雨量不多的秋初为好。 采取土壤样品要考虑的几个问题 土质肥，微生物含量高，特别肥沃的土壤中细菌多，放线菌少；在植物残体枯枝落叶下的土壤中较多含有拮抗性真菌。 离地面5~20cm处的土壤通气良好、不受阳光直射，含菌量最高。 采土季节以春秋两季最好。 采土方法：选择适当地点、铲除表土、取土样数十克，盛入事先准备的无菌防水纸袋中，其上记录采土时间、地点、植被情况等。 多点采土、混合分离，可以代表每一地块上的微生物分布平均情况 （2）增殖培养 含有目的菌较多的土样不需要富集培养 如果原有样品中目的菌含量低，可以人为地添加相应的基质，培养使之以较其它微生物更快的速度生长繁殖，从而提高它们在样品中的比例，便于分离。 富集培养的一般方法：采用有利于目的菌种而不利于无关微生物的营养和培养条件，以达到使目的菌种在群体中比例上升的目的。 例如碳源利用的控制，可选定糖，淀粉、纤维素，或者石油等，以其中的一种为唯一碳源，那么只有利用这一碳源的微生物才能大量正常生长，而其它微生物就可能死亡或淘汰。这样对下阶段的纯种分离就会顺利得多。 一些有特定物质产生能力的菌种，不容易富集，只有通过大量艰苦的工作筛选取得。 （3）培养分离 尽管通过增殖培养效果显著，但还是处于微生物的混杂生长状态。因此还必须分离，纯化。在这—步，增殖培养的选择性控制条件还应进一步应用，而且控制得细一点，好一点。纯种分离的方法有划线分离法、稀释分离法。 （5）菌种鉴定 经典分类鉴定方法：形态特征、生理生化特征、血清学试验等。 现代分类鉴定方法：遗传特性、细胞化学组分、计算机数值分析。 （6）毒性试验 自然界的一些微生物是在一定条件下产毒的，将其作为生产菌种应当十分当心，尤其与食品工业有关的菌种，更应慎重。据有的国家规定，微生物中除啤酒酵母、脆壁酵母、黑曲霉、米曲霉和枯草杆菌作为食用无须作毒性试验外，其他微生物作为食用，均需通过两年以上的毒性试验。 二、菌种的保藏与复壮 （一）菌种的保藏 1、菌种保藏的意义 菌种是从事微生物学以及生命科学研究的基本材料，特别是利用微生物进行有关生产如抗生素、氨基酸、酿造等工业，更离不开菌种。所以菌种保藏是进行微生物学研究和微生物育种工作的重要组成部分。其任务首先是使菌种不致死亡，同时还要尽可能设法把菌种的优良特性保持下来而不致向坏的方面转化。 2、菌种保藏的原理 菌种保藏主要是根据菌种的生理生化特点人工创造条件使孢子或菌体的生长代谢活动尽量降低，以减少其变异。一般可通过保持培养基营养成分在最低水平缺氧状态，干燥和低温，使菌种处于“体眠”状态，抑制其繁殖能力。 一种好的保藏方法首先应能长期保持菌种原有的优良性状不变，同时还需考虑到方法本身的简便和经济，以便生产上能推广使用。 3、菌种保藏的方法 （二）菌种的衰退与复壮 1、菌种衰退：菌种经过长期人工培养或保藏，由于自发突变的作用而引起某些优良特性变弱或消失的现象。 2、菌种退化的原因： 基因突变； 变异菌株性状分离； 诱变的单菌落是由—个以上孢子或细胞形成 菌落由—个孢子或单个细胞形成，但它是多核细胞 单核孢子发生突变时，双链DNA上仅—条链上某个位点发生变化 连续传代 其它因素 菌种保藏不当 生长条件不满足（培养基组成、培养条件） 3、防止菌种退化的措施 控制传代次数 选择合适的培养条件 选择合适的保藏方法 菌种稳定性检查 分离复壮 4、菌种复壮：使衰退的菌种重新恢复原来的优良特性。 复壮措施： 对已衰退菌种配合一定培养条件进行单细胞分离纯化 淘汰衰退的个体 选择合适的培养基 三、菌种选育