鸡转录因子CEBPα、KLF2、 KLF3、 KLF7、PPAR α对L-FABP启动子活性的影响.pdfVIP

2014年 第5O卷 第17期 GeneticsandBreeding ·遗传高种 鸡转录因子C／EBPOL、KLF2、KLF3、KLF7、 PPAROL对L—FABP启动子活性的影响 贺 綦 ，史洪岩。，王海霞 ，高广亮1,2，王启贵 一，李 辉 (1．东北农业大学动物科学技术学院，农业部鸡遗传育种重点实验室 ，黑龙江省普通高等学校动物 遗传育种与繁殖重点实验室 ，黑龙江哈 尔滨 150030；2．重庆市畜牧科 学院，重庆 402460) 摘 要 ：L—FABP是脂肪酸结合蛋 白家族重要 的成员。研 究发现L—FABP在不饱和脂肪酸 、饱和脂肪酸 、胆 固醇 、 胆汁酸等转运过程 中扮演重要角色。目前 ，对哺乳动物L—FABP的活性调控机制 的研 究 已经取得 了一定进展 ，但 在禽类上 的相关报道还 比较 少见 。为探讨鸡L—FABP基 因的表达调控机制 ，本研 究利用报 告基 因方法在人肝癌 细胞 系(HEGP2)中研 究C倔8 、碰 、碰 乃 、 、 4R 基 因对鸡 一 曰P基 因启动子活性的影响。结果表 明：C 8 显著抑制 了鸡三一 日P基 因的表达 ，KLF2、甩 乃 、碰 、 Rot基 因显著促进 了 一肼 曰P基 因的表 达 ．这些结果为深入研 究鸡L一 BP基 因表达调控机制奠定 了基础 。 关键词 ：￡一用 曰P基 因；启动子 ；活性 分析 ；鸡 中图分类号 ：$831．2 文献标识码 ：A 文章编号 ：0258—7033(2014)17-0013—05 禽类脂质代谢及其调控与哺乳动物不 同，脂质 少。本研究前期发现 ，鸡 L—FABP基因受到C／EBPa基 合成主要是在肝脏 中进行 ，而脂肪组织只是贮存的 因负调控作用㈣，并且通过生物学软件预测鸡L—FABP 场所 】『1，因此肝脏在禽类脂类代谢 中发挥着非常重 基因启动子区还存在PPARa转录因子结合位点。因 要的作用r2]。肝细胞中肝脏型脂肪酸结合蛋白(1iver 此本研究构建 了鸡 真核表达载体pCMV—HA— fattyacidbindingprotein，L—FABP)表达水平高并且 PPARa，并利用前期课题组构建 的鸡C／EBPa、KLF2、 与脂肪酸代谢关系密切f31。研究表明，一 基因沉 KLF3、KLF7真核表达载体，利用报告基因活性检测 默的小 鼠脂肪酸结合能力下降，甘油三酯总量下降， 方法在人肝癌细胞系(HEGP2)中研究这些转录因子 脂肪酸吸收和肝脏磷脂扩散发生改变 41『。Storch等 对鸡L—FA P基因启动子活性的影响，为深入研究鸡 发现 ，L—FABP与小肠 内脂质的吸收、肝脏内脂类转 一 尉BP基因表达调控机制奠定基础 。 运 以及脂蛋 白代谢均有密切关系。L—FABP可 以调节 1 材料与方法 胆固醇的吸收和代谢 ，且能影响膜双分子层中胆固 醇的移动6【1。 1．1 材料 和试 剂 克 隆载体 pEASY—T1Simple 鸡 —FABP基因特异表达于肝脏组织和小肠 [7]， CloningKit、TransStart酶 、抗HA标签鼠单克隆抗体 、 与哺乳动物L—FABP蛋白结构相似l81。哺乳动物上研 抗myc标签鼠单克隆抗体购 自北京全式金生物技术 究显示 ，L一 BP基因启动子区存在包括PPAR元件 、 有限公司；T4DNA连接酶购 自北京NEB公司；限制 甾族调节元件SRE、C／EBPet和AP1等多个重要 的调 性 内切酶SalI、XhoI购 自TaKaRa公司；质粒 回收试 控元件，这些重要 的顺式作用元件已经通过实验鉴 剂盒购 自Promega公司；山羊抗小 鼠抗体 、一actin抗 定l9_。尽管在哺乳动物中L—FABP调控机制的研究较 体、ECL显色液购 自碧云天生物技术有限公司；转染 为透彻，但在家禽上关于L一尉 基因的报道相对较