乳酸菌食品级基因表达系统的研究进展.pdfVIP

·8 · 《上海畜牧兽医通讯》　2008 年第 1 期 乳酸菌食品级基因表达系统的研究进展 ( ) 王海英 　祁克宗 　彭开松 　 安徽农业大学动物科技学院　安徽 合肥 　230036 ( ) 　　乳酸菌 lactic acid bacteria ,LAB 是一类可发酵碳水化合 酵 ,在一定程度上可能会限制该系统的应用 。 物 ,并产生大量乳酸的革兰氏阳性细菌的统称 〔1〕, 因其在食 因此我们可根据乳酸菌具有发酵特殊糖类的表型特征 , 品工业中应用广泛且对人和动物无致病性 ,被公认为是安全 构建新的食品级载体 。例如 :蜜二糖是乳酸菌的一个特殊的 ( ) α 级 generally regarded as safe , GRA S 微生物 。与大肠杆菌 、 发酵底物 ,它含有 - 半乳糖苷酶 ,且仅位于棉子糖乳球菌 酵母菌相 比 ,乳酸菌的分子遗传学的研究起步较晚 。近年 上 ,功能区分布在此 DNA 片段 aga 和 galR 上的两个可读码 来 ,乳酸菌分子生物学及作用机制的研究取得了重大发展 , 框上 ,所以棉子糖乳球菌可作为 aga 基因来源 。利用棉子糖 ( ) + 加之乳酸菌的模式菌乳酸乳球菌 Lactococcus lactis 的完整 乳球菌的aga 基因的Mel 表型特征可开发为新的选择标记 , 基因组已经测序完成 〔2 〕,这为乳酸菌基因工程的发展和表达 但 目前仅限于嗜热链球菌实验室菌株的研究中 , 还不能在 载体的构建奠定了基础 ,也为其在食品、医药工程及其改 良 〔4 〕 工程菌株中使用 ,Labrie 等 正从质粒的复制类型着手 ,研 方面的应用提供了可能 ,因此乳酸菌食品级表达系统的构建 究构建新型质粒 。 及应用已成为该领域研究的前沿和热点 。 2 . 2 　细菌营养缺陷型标记 1 　食品级基因表达系统的基本要求 营养缺陷型作为选择标记 ,基于嘌呤、嘧啶生物合成中 , “食品级”系统的定义为 :能最大限度应用于食品工业 , 〔5 〕 改变抑制无意义基因突变的 t RNA 基因。Dickely 等 构建 或产生用在食品中的产物的系统 。食品级基因表达系统的 了一个乳酸菌食品级载体 p F G1 ,它由乳酸乳球菌一个质粒 ( ) ( ) 基本要求如下 : 1 载体必须是食品级的 , 由来 自同源宿主或 的最小复制子 、乳球菌的赭石突变 Ochre 抑制基因 supB 及 密切相关的安全型微生物的 DNA 组成 ,且不含有非食品级 一段人工合成的含有 11 个限制酶切位点的多克隆位点组 功能性 DNA 片段 ; (2) 宿主菌为食品级且可鉴定及稳定的微 成 ,载体大小约 2 kb