吞噬淋转.ppt

第十次 实验 淋巴细胞转化试验 细胞吞噬率与吞噬指数测定 淋巴细胞转化试验㈠ 原理 ㈡ 方法-形态法 ㈢ 结果判定 表 未转化和转化淋巴细胞的形态特征 未转化淋巴细胞 转化淋巴细胞 转化淋巴细胞 核分裂像 细胞吞噬率与吞噬指数测定㈠ 原理 ㈡ 方法 ㈢ 结果判定 ㈣ 结论 实验报告 * * 淋巴细胞 外来物质 细胞内大分子物质的合成增加 淋巴细胞代谢和形态变化 非抗原性刺激物：丝裂原 PHA、ConA、LPS、SPA 抗原性刺激物：PPD 同位素法 形态法、MTT法 PHA 无PHA 1、培养：静脉血+PHA，37℃培养72h，每天摇动1次。 2、收获：摇匀取出放入离心管内，2000r/min离心20min，弃上清至余液体高0.5cm，混匀取1滴推片，晾干（冷风吹干）。 3、染色：甲醇固定1min，姬姆萨染液染色10min，水冲洗，吸干。 4、油镜观察。 根据细胞大小、胞核和胞浆特征等进行判别。转化过程中，常见的细胞类型有成熟淋巴细胞、过渡型淋巴细胞、淋巴母细胞、核分裂像细胞等。 细胞特征 细胞直径（μm） 12~22 12~16 6~8 细胞核 增大、疏松 增大、疏松 不增大、密集 核仁 清晰1~4个 有或无 无 有丝分裂 有或无 无 无 胞质 增多、嗜碱 增多、嗜碱 少、天青色 浆内空泡 有或无 有或无 无 伪足 有或无 有或无 无 淋巴母细胞 过渡型 转化的淋巴细胞 未转化淋巴细胞 淋巴细胞标志及功能检测 龚道科 2002.4 转化率= 转化的淋巴细胞数 转化淋巴细胞数+未转化淋巴细胞数 ×100% 计数100个淋巴细胞，求转化率 正常参考值：60%～80%，＜50%为降低 ㈣ 结论 吞噬细胞的吞噬作用是构成机体非特异性免疫的重要组成部分，当病原微生物突破机体的体表屏障进入体内,吞噬细胞将通过吞噬或吞饮将其吞入胞浆内。 中性粒细胞具有很强的吞噬作用。本实验可验证中性粒细胞的吞噬功能。 1、无菌采末梢血2滴（毛细滴管约3/4）置入微量反应板（含抗凝剂） 2、加灭活金黄色葡萄球菌悬液2滴，牙签混匀 3、37℃温箱孵育30min（每10min混匀1次） 4、取培养液1滴推片，晾干，甲醇固定1min，用姬姆萨染液染8min，水冲洗，吸干 5、油镜观察 镜下：中性粒细胞内可见呈蓝紫色分叶核，其淡红色胞浆中可见被吞噬到细胞内紫色的金黄色葡萄球菌。 50个Neu中吞噬 细菌的细胞数 50 ×100% 吞噬率＝ 50个Neu中吞噬的 细菌总数 50 吞噬指数＝ 计数50个中性粒细胞，求吞噬率和吞噬指数