斑马鱼在心血管研究中的应用.doc

斑马鱼作为模式生物在心血管疾病中的应用 临床医学五年制1206班 高天奇 2208120607 摘要： 斑马鱼属辐鳍鱼纲鲤形目鲤科。其身体延长而略呈纺锤形，头小而稍尖，吻较短，全身布满多条深蓝色纵纹似斑马，与银白色或金黄色纵纹相间排列，故而得名。斑马鱼和人类基因有着87%的高度同源性，作为模式生物的优势突出。而对于心血管方面，斑马鱼和人类心血管发育的过程极为相似，其整体发育过程易于观察，超微结构易于捕捉等，都可以为研究者的深入研究提供条件。 关键词：高度同源性 模式生物 发育过程 生物性状概述： 斑马鱼是一种常见的热带鱼。斑马鱼体型纤细，体长4～6厘米。体呈纺锤形。背部橄榄色，体侧从鳃盖后直伸到尾未有数条银蓝色纵纹，臀鳍部也有与体色相似的纵纹，尾鳍长而呈叉形。雄鱼柠檬色纵纹；雌鱼的蓝色纵纹加银灰色纵纹，对水质要求不高。孵出后约3个月达到性成熟，成熟鱼每隔几天可产卵一次。卵子体外受精，体外发育，胚胎发育同步且速度快，胚体透明。发育温度要求在25-31℃之间。原产自孟加拉，印度，巴基斯坦等南亚国家，后被引进美国，斯里兰卡等地。 作为模式生物的个体优势： 斑马鱼由于个体小，养殖花费少，能大规模繁育，且具许多优点，吸引了众多研究者的注意。经过30多年的研究应用和系统发展，已有约20个斑马鱼品系，斑马鱼的细胞标记技术、组织移植技术、突变技术、单倍体育种技术、转基因技术、基因活性抑制技术等已经成熟，且有数以千计的斑马鱼胚胎突变体，是研究胚胎发育分子机制的优良资源，有的还可做为人类疾病模型。斑马鱼已经成为最受重视的脊椎动物发育生物学模式之一，在其它学科上的利用也显示很大的潜力。由于斑马鱼基因与人类基因的相似度达到87%，这意味着在其身上做药物实验所得到的结果在多数情况下也适用于人体，因此它受到生物学家的重视。因为斑马鱼的胚胎是透明的，所以生物学家很容易观察到药物对其体内器官的影响。此外，雌性斑马鱼可产卵200枚，胚胎在24小时内就可发育成形，这使得生物学家可以在同一代鱼身上进行不同的实验，进而研究病理演化过程并找到病因。一般来说，在基因组学，免疫学研究中应用斑马鱼较为广泛。但将其利用于各个系统，器官生理，病理生理研究，也是可行的。 心血管发生： 斑马鱼有着和人类类似的心血管发生及造血过程。斑马鱼血液发生过程一般分两个阶段 ：原始造血和定向造血。原始造血发生于中胚层中间细胞团（ICM）处［1］。起源于中胚层的成血管母细胞分化成两系 : 造血系与内皮系，原始造血主要产生骨髓细胞与红细胞［2］。定向造血发生于主动脉性腺中肾区（AGM），该过程持续的时间较长，产生红细胞、髓细胞和淋巴细胞等血细胞［3］。造血干细胞（HSCs）在 AGM 处形成，随后迁移到胸腺、肾、胰岛和尾部造血组织（CHT）各处。在胸腺中，常见淋巴祖细胞（CLP）分化形成 T 淋巴细胞；在肾脏处，HSCs 分化形成红细胞、骨髓细胞和 B淋巴细胞 ；在 CHT 处，HSCs 则分化成红细胞和骨髓细胞［4］。 斑马鱼心脏形成过程包括 ：5hpf 胚胎腹侧区出现心脏前体细胞 ；15hpf 前体细胞向胚轴区汇集，出现心内膜前体细胞和前体心肌细胞 ；17hpf 心肌前体细胞迁移到中线，细胞间相互连接，心肌融合 ；22hpf 心锥延伸形成线性心管，心脏开始收缩 ；28hpf 心房和心室形成 ；36hpf 心脏发生环化 ；48hpf 功能性瓣膜形成。斑马鱼的血管原细胞也来自中胚层。血管原细胞约在 10~15 体节时迁移至躯干中线部，后形成血管索。血管索位于内胚层与脊索之间，然后血管原细胞转分化形成成血管细胞和造血细胞。成血管细胞进一步分化形成轴向血管、背部主动脉和后主静脉 ［5］。 作为心血管研究模式生物的根据与优势： 斑马鱼作为研究血液和心血管疾病模型具有显著优势，主要表现在以下几个发面 ：（1）斑马鱼作为“心脏发育研究的窗口”［6］， 整个心脏发育过程可被高分辨率成像，心脏形态和功能可在活体胚胎上观测和发现。（2）斑马鱼胚胎和日龄较小的幼鱼可通过皮肤弥散供氧，即使在外界供氧终断的情况下胚胎仍能存活较长一段时间，这种优势在研究致死性心血管畸形及侧枝动脉生成等方面是小鼠所不具备的 ［7］。（3）斑马鱼中枢神经系统、视觉系统以及血液在分子水平上与人类的相似度达 85%，尤其是心血管系统，早期的发育过程与人极度相似。 以动脉粥样硬化症为例简述其在医学研究中的应用： 动 脉 粥 样 硬 化（atherosclerosis，AS）：AS是一种人类常见病和多发病。由于血浆中高密度脂蛋白水平远远高于低密度和极低密度脂蛋白水平，因此斑马鱼一般不会自发形成 AS［8］。 在用含高脂食物持续喂养的情况下，斑马鱼血浆中低密度和极低密度脂蛋白的水平显著提高，同时伴有脂蛋白的氧化和血管内皮细胞结构以及功能的紊乱现象，