第五章生物芯片技术.ppt

第五章 生物芯片技术 生物芯片（biochip）的概念 指采用光导原位合成或微量点样等方法，将大量生物大分子如核酸片段、多肽分子甚至组织切片、细胞等生物样品有序地固化于支持物的表面，组成密集二维分子排列，然后与已标记的待测生物样品中的靶分子杂交，通过特定的仪器对杂交信号的强度进行快速、并行、高效地检测分析，从而判断样品中靶分子的数量和性质。 生物芯片（biochip）的分类 根据芯片上固定的探针分类： DNA芯片、蛋白质芯片、细胞芯片、组织芯片 根据芯片的用途不同分类： 表达分析芯片、测序芯片、芯片实验室 基因芯片（Genechip） 又称DNA芯片,是根据核酸杂交的原理，将大 量核酸分子固定于支持物上，然后与标记的样品 进行杂交，通过检测杂交信号的强度及分布来进 行分析。 蛋白质芯片(proteinchip) 利用抗体与抗原特异性结合即免疫反应的原理，将蛋白质分子（抗原或抗体）结合到固 相支持物上，形成蛋白质微阵列，即蛋白质 芯片。 芯片实验室(labs-on-chip) 高度集成化的集样品制备、基因扩增、核酸标记及检测为一体的便携式生物分析系统。 实现生化分析全过程集成在一片芯片上完成，从而使生物分析过程自动化、连续化和微缩化。 芯片实验室是生物芯片技术发展的最终目标。 第一节 DNA芯片 第一节 DNA芯片 DNA芯片技术包括四个主要步骤 芯片制备 样品制备 杂交反应和信号检测 结果分析 （一）载体选择与预处理  载体：用于连接、吸附或包埋各种生物分子并使其以固相化状态进行反应的固相材料。 载体材料： 实性：玻片、硅片 膜性：硝酸纤维素膜、尼龙膜和聚丙烯膜 （二）DNA芯片的制备 1. 原位合成（in situ synthesis）:适用于寡核苷酸 ①光导原位合成法 ②原位喷印合成 ③分子印章多次压印合成 2. 点样法 点样法：利用手工或自动点样装置将预先制备好的寡核苷酸或cDNA样品点在经特殊处理过的玻片或其他材料上。 两种制备方法比较 三、杂交与结果分析 （一）杂交反应：与传统的杂交方法类似 （二）杂交信号的检测：最常用荧光法 （三）数据分析：芯片杂交图谱的处理与存储由专 门设计的软件来完成。 四、基因芯片技术在医学中的应用 基因表达分析 基因型、基因突变和多态性分析 疾病诊断：遗传性、感染性、肿瘤 药物筛选 指导用药及治疗方案 预防医学 能诊断癌症的基因芯片 DNA芯片的特点 高通量： 微型化： 自动化： 第二节 蛋白质芯片 第二节 蛋白质芯片 蛋白质芯片（protein chip）, 又称蛋白质微阵列，是指以蛋白质或多肽作为配基,将其有序地固定在固相载体的表面形成微阵列；用标记了荧光的蛋白质或其它分子与之作用，洗去未结合的成分，经荧光扫描等检测方式测定芯片上各点的荧光强度，来分析蛋白质之间或蛋白质与其它分子之间的相互作用关系。 第二节 蛋白质芯片 根据制作方法和应用的不同，蛋白质芯片分为两种 蛋白质功能芯片 细胞中的每一种蛋白质占据芯片上一个确定的 点，主要是高度平行地检测天然蛋白质活性。 蛋白质检测芯片 将能够识别复杂生物溶液（如细胞提取液）中 靶多肽的高度特异性配体进行点阵。这种芯片 能够高度并行的检测生物样品中的蛋白质。 第二节 蛋白质芯片 蛋白质芯片技术在医学中的应用 特异性抗原抗体的检测 生化反应的检测 疾病诊断 对疾病分子机制的研究 药物筛选及新药的研制开发 小 结 1.名词解释 生物芯片 DNA芯片 蛋白质芯片 2.表达芯片的探针如何设计？ 3.基因芯片的应用价值 4.芯片技术的基本流程 第二节 蛋白质芯片 * * * 生物大分子 作用原理:DNA-DNA、DNA-RNA、抗原-抗体之间可发生的复性与特异性结合. 基因芯片发展历史 Southern Northern Blot Dot Blot Macroarray Microarray 基因芯片 荧光标记的样品 共聚焦显微镜 获取荧光图象 杂交结果分析 探 针 设 计 杂交 一、芯片制备 一、芯片制备 光导原位合成法 表达谱比较分析 测序、查明点突变 制备方式直接和简单，点样的样品可事先纯化 制作复杂、价格昂贵 中、低密度 高密度 可设计和制备符合自己需要的芯片 根据已知的DNA编制程序 点样法 原位合成 样品的分离纯化 DNA , mRN