壬基酚对大鼠Leydig细胞3β-HSD的影响.pdfVIP

mol/L ，the differences were significant, Leydig 细胞为研究对象，探讨了NP 对大 P0.05. The content of 3 β-HSD decreased 鼠原代培养Leydig 细胞3ß-HSD 基因表达 gradually, at the doses of 1.0,10 μmol/L, the 及其蛋白的影响。 differences were significant in Leydig cells， P0.05. The expression of 3 β-HSD mRNA 1 材料和方法 decreased, the difference was significant at 1.1 动物 清洁级雄性 SD 大鼠，体重 the dose of 10 μmol/L, P0.05. Conclusions : 200-220g，由第三军医大学实验动物中心 Nonylphenol could down-regulate the 提供，许可证号： expression of 3 β-HSD gene, decrease the 1.2 主要试剂 500 目（30um）漏斗式细胞 content of 3 β-HSD, and inhabit the 筛，上海市捷瑞生物工程有限公司；壬基 production of testosterone secreted by 酚 美国Sigma 公司；D-MEM/F12 培养基， cultured Leydig cells. Gibco 公司；胎牛血清，Hyclone 公司；Ⅰ Keywords: Nonylphenol; Leydig cell; 型胶原酶，Sigma 公司；胰蛋白酶，Difco 3ß-HSD; testosterone 公司；雄甾烷，Augsburg-Germang；RIPA 裂解液(强)、PMSF ，碧云天生物技术研究 壬基酚（Nonylphenol,NP ）是非离 所；Trizo l，美国MRC 公司；Primer 、逆 子表面活性剂壬基酚聚氧乙烯醚 转录试剂盒、荧光定量试剂，盒 ELISA 试 （Nonylphenol ethoxylates ,NPEs ）的主要 剂盒，宝生物工程(大连)有限公司。 [1] 降解产物 ，壬基酚作为一种环境内分泌 1.3 Leydig 细胞的分离、纯化、和原代培 [2] [5] 干扰物，具有雌激素样活性 ，在一定剂 养 在继海续等 方法的基础上，适当调 量下，对雄性动物的生殖系统、血液和免 整。颈椎脱臼处死大鼠，75%的医用酒精 疫系统等具有有害作用。有研究表明壬基 棉球消毒大鼠下腹部3 次，用无菌剪刀、 酚(大于0.5umol/L)能抑制雄性动物睾酮的 镊子取出睾丸立即放入装有适量 PBS [3] 分泌 ，进而影响雄性个体的生殖与发育， (0.01 mol/L pH 7.2-7.4)的烧杯中，PBS 冲 但其作用机制目前尚未清楚。Leydig 细胞 洗，冰面上剥离睾丸白膜，去除睾丸组织 是合成和分泌睾酮的主要细胞，约95% 以 内的细小血管，注意保持睾丸实质完整。 上血浆睾酮是由它合成分泌的，3ß-HSD 将除膜睾丸置 0.05% 的Ⅰ型胶原酶中， 是睾酮合成的关键酶，在此酶的作用下， 37℃、100 r/min 恒温振荡消化10- 15min， 雄烯二酮转换成睾酮，整体动物实验研究 待睾丸实质散开且生精小管的连续性完好 表明，NP 能下调3ß-HSD mRNA 的表达 时，加入等体积含 5% 胎牛血清的 [4] 水平 。本实验以合成睾酮的主要细胞 D-MEM/F12 培养液终止消化，经 500 目 98 (30µm)不锈钢细胞筛过滤，收集滤液， 基酚24h 后，吸干培养液，PBS 清洗，加 1000r/min 离心 7min ，弃上清，悬浮细胞