质粒DNA的提取和鉴定().pptVIP

一，质粒DNA的提取 二，基因组DNA的提取 限制性内切酶酶切分析 三，DNA片段的连接与转化 重组子的筛选与鉴定 凝胶中DNA的回收 四，RNA的分离纯化 逆转录PCR 1，质粒DNA的提取 2，基因组DNA的提取 3， 限制性内切酶酶切分析 4，DNA片段的连接接与转化 载体，外源DNA片段，工具酶，受体细胞 质粒DNA的提取及鉴定 生物化学与分子生物学系 实验目的 掌握质粒DNA制备的原理和方法 了解质粒琼脂糖凝胶电泳分离 Bacterial DNA Plasmids 质粒 质粒主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中，独立于染色体之外的、能自主复制的双链环状脱氧核糖核酸物质。 基本思路 培养细菌使质粒扩增； 收集和裂解细菌； 分离质粒DNA 电泳检测； 实验流程 细菌于LB培养基中培养过夜，分装（1ml/支），4000rpm离心2min，弃上清。 沉淀重悬于100?l溶液Ⅰ中, 震荡混匀。 加入200 ? l新鲜配制的溶液Ⅱ，颠倒混匀，不要震荡！（此步骤时间不宜过长） 加入150 ? l溶液Ⅲ，颠倒混匀，冰浴5min，12000rpm离心10min。 上清移至另一干净EP管中，加入等体积饱和酚（约450 ? l），颠倒混匀，12000rpm 离心10min。 实验流程 上清移至另一干净EP管中，加入等体积酚/氯仿，颠倒混匀，1