重迭延伸PCR技术及其在基因工程上的应用.pdfVIP

分子植物育种，2006年，第4卷，第5期，第747-750页 MolecularPlantBreeding,2006,Vol.4,No.5,747-750 新思路、新技术、新方法 NovelThinkingTechnology 重叠延伸PCR技术及其在基因工程上的应用 1,2 2 2 2 1* 3* 徐芳 姚泉洪 熊爱生 彭日荷 侯喜林 曹兵 1南京农业大学园艺学院,南京,210095;2上海市农业科学院生物中心,上海,201106;3三亚市南繁科学技术研究院,三亚,572000 *通讯作者,hxl@njau.edu.cn,caobing@sanya.gov.cn 摘 要 重叠延伸PCR技术(genesplicingbyoverlapextensionPCR，简称SOEPCR)由于采用具有互补末端 的引物，使PCR产物形成了重叠链，从而在随后的扩增反应中通过重叠链的延伸，将不同来源的扩增片段重 叠拼接起来。此技术利用PCR技术能够在体外进行有效的基因重组，而且不需要内切酶消化和连接酶处 理，可利用这一技术很快获得其它依靠限制性内切酶消化的方法难以得到的产物。重叠延伸PCR技术成功 的关键是重叠互补引物的设计。重叠延伸PCR在基因的定点突变、融合基因的构建、长片段基因的合成、基 因敲除以及目的基因的扩增等方面有其广泛而独特的应用。本文综述了重叠延伸PCR的原理和目前的应用 情况，并指出了此技术中的注意事项，展望了其应用前景。 关键词 重叠延伸PCR,互补引物,基因工程 SOEPCRanditsApplicationinGeneticEngineering 1,2 2 2 2 1* 3* XuFang YaoQuanhong XiongAisheng PengRihe HouXilin CaoBing 1CollegeofHorticulture,NanjingAgriculturalUniversity,Nanjing,210095;2Agro-BiotechnologyResearchCenterofShanghaiAcademyofAgricul- turalSciences,Shanghai,201106;3SanyaScienceTechnologyAcademyforCropWinterMultiplication,Sanya,572000 *Correspondingauthor,hxl@njau.edu.cn,caobing@sanya.gov.cn AbstractGenesplicingbyoverlapextensionPCR (SOEPCR)isprovidedforjoiningdifferentDNAmolecules bymeansofPCRcarriedoutoneachmoleculeusingoligonucleotideprimersdesignedsothattheendsofthere- sultantPCRproductscontaincomplementarysequences.ThismethodisanewapproachforrecombiningDNA moleculesatprecisejunctionsirrespectiveofnucleotidesequencesattherecombinationsiteandwithouttheuseof restrictionendonucleasesorligase.Theoverlapprimersdesignisthekeyfactorforthesuccessfulaccomplishment ofSOEPCR.SOEPCRiswidelyandparticularlyappliedinthesite-directedmutagenesisofgene,constructionof fusiongene,synthesisoflongsegmentsofDNA,geneknockout ，generationofinterestgeneandsoon.Thispaper describedtheprincipleandapplicationofSOEPCR.Somerelateddetailsaboutthismethodwerecommentedon. Inaddition,th