嗜热脂肪芽孢杆菌高温蛋白酶分解毛发角蛋白的研究.pdfVIP

氨基酸和生物资源2004．26(3)：52—54 ^mf聊^ci也＆口妇w冠嚣our船 嗜热脂肪芽孢杆菌高温蛋白酶分解毛发角蛋白的研究4 刘军1，陈向东2，戴玄3，唐兵2，彭珍荣2一 (1武汉工业学院生物与化学工程系，湖北，武汉，430023； 2武汉大学生命科学学院，湖北，武汉，430072；3莺庆师范学院，重庆市，涪陵，408003) 明，在体积分数为2％的巯基乙醇存在的条件下，wF一146高温蛋白酶对毛发角蛋白有明显的水解作用。对酶解液氨基酸分 析表明，酶解液中含有对照液中没有的游离蛋氨酸和亮氨酸，且游离氨基酸总量是对照样品的2．4倍，达158mg·L～。此 外，酶解液中含有大量的肽。 关键词：嗜热脂肪芽孢杆菌；高温蛋白酶；毛发角蛋白酶解 中圈分类号：Q556 文献标识码：A 文章编号：1006—8376(2004)03—0052—03 角蛋白以动物的毛发、羽毛等为主要形式大量 Fd培养基各成分质量分数(％)：葡萄糖1，酵 存在于自然界。但是，角蛋白是一种抗降解性很强 母膏O．2，蛋白胨0．02，Nacl O．5，KH2P04 O． 的硬性蛋白，含有大量的二硫键，不溶于水，不能为 0．125，MgS0‘·7H200．001，FeS04 8．0。 一般的蛋白酶所消化。目前，对角蛋白的利用主要 oo叭，pH 采用物理、化学方法。这些方法所需条件苛刻，或采 1．3方法 用高温高压，或利用高浓度的强酸强碱，造成严重的 1．3．1蛋白酶活力的测定 环境污染。因此，采用生物酶解法利用角蛋白具有 蛋白酶活力的测定方法参见文献[1]。 极大的意义。 1．3．2粗酶液的制备 嗜热脂肪芽孢杆菌(口口cⅢwmⅡr0￡^e唧砌w) wF—146菌种在PYs斜面上58℃活化24h，从 mL wF一146是本实验室筛选到的一株高温蛋白的高中挑取一环菌苔接种于装有50 PYs液体培养基 的250mL的三角烧瓶中，于58℃、250 产菌株…，该菌株所产蛋白酶具有良好的热稳定性 rpm活化培 和pH稳定性，可用于水解猪血蛋白生产氨基酸及 养16h。然后接种一定量的WF—146PYs菌悬液 mL 水解虾壳生产甲壳素，是一株具有重要应用价值的 于装有50 Fd发酵培养基的250mL的三角瓶 中。在58℃、250rpm发酵培养48 野生菌株”“1。本文研究了嗜热脂肪芽孢杆菌wF h。收集经发酵 一146所产高温蛋白酶对毛发角蛋白的降解。结果 的菌悬液，3000rpm离心15min，取上清液用于酶解 表明，该菌株所产高温蛋白酶对毛发角蛋白有较大 实验。 的水解能力。 1．3．3毛发角蛋白液的制备 称取一定量的毛发(取自理发店)，按适当比例 1材料和方法 加入稀Na0H溶液，在一定温度下保温，直至毛发完 1．1材料 全溶解