自制溶解液对卡介苗抗酸染色实验的影响.pdfVIP

·439· ·技术·方法· 自制溶解液对卡介苗抗酸染色实验的影响 段长恩秦卫玲孙爱平 【摘要l 目的探讨自制溶解液对以卡介苗为原材料进行抗酸染色实验结果的影响。方法 采用 双盲法将实验室内的同学随机分为两组，试验组采用自制溶解液溶解卡介苗，而对照组采用生理盐水溶 解卡介苗，严格按照抗酸染色方法进行染色，结果以显微镜油镜下抗酸细茵阳性率、细茵分布和色泽及 背景的有无综合判断染色质量。结果试验组镜检阳性率为88．0％，细茵染色鲜艳亮丽的有65．7％， 74．4％细茵分布均匀，41．1％有淡蓝色的背景存在。对照组分别为60．6％、36．3％、28．9％、23．0％。 自制溶解液可以显著提高用卡介 试验组的染色效果明显优于对照组(Y2—18．50，P0．005)。结论 苗进行抗酸染色实验的染色质量。 【关键词】溶解液卡介苗抗酸染色 SPSS 痰涂片结核分枝杆菌检查是确诊肺结核病的主要方法， 12．0软件包。 也是制订化疗方案和考核治疗效果的主要依据…。抗酸染色 3结果 实验是医学院校细菌学实验课必做的一项内容。但是随着我 试验组和对照组分别有10名和8名同学由于操作方法 国对结核病人的随访、治疗等措施的进一步完善以及新生儿 错误压碎载玻片，无法报告试验结果。余者均按要求报告并 疫苗接种的普及，肺结核病的发病率逐年降低，同时病人痰中 由授课教师验证。试验组油镜下检到抗酸细菌的载玻片有 查到结核分枝杆菌的阳性率也很低。为了解决实验原材料匮 乏的问题，我们尝试应用卡介苗替代致病性结核分枝杆菌开 展抗酸染色实验，虽然取得了较好的效果，但是也存在一些缺 (28．9％)、74(23．0 点(细菌容易脱片和分布不均匀等)。不便于细菌形态的观察。 oA)。两组比较有显著差别(Y2=18．50， 在近几年的实验教学中本人对该方法不断改进，运用自制的 P0．005)，试验组的染色效果明显优于对照组。 溶解液溶解卡介苗进行抗酸染色，获得了荫意的效果。 4结果分析 1材料 试验组与对照组的不同之处主要在于溶解液的成份。试 注射用卡介苗(北京生物制品所)、Zienhl—Neelsen抗酸验组的溶解液内加入了蛋黄和叶温一80，而对照组使用的是 染色液j、吐温一80、新鲜鸡蛋、微量移液枪、恒温培养箱、普 生理盐水。试验中所用的卡介苗是由有毒的牛型结核杆菌经 通光学娃微镜。 过反复传代培养而获得的减毒变异株制成的用于预防结核病 2方法 的活菌苗，牛分枝杆菌在生长特性、化学组成及毒力等方面与 2．1 自制溶蟹液的配制 取新鲜鸡蛋一枚在75％的酒精内 结核分枝杆菌极为相似Ⅱ]。蛋黄是培养结核分枝杆菌的Lo— ml灭菌生 浸泡3～5min后无菌操做抽出蛋黄。加入盛有250 理盐水的输液瓶内，用力振荡使蛋黄充分分散后，用无菌纱布 生长因子可以有效地促进结核杆菌的生长，溶解液内的蛋黄 过滤并加入2ml吐温一80，充分摇匀后分装，4℃冰箱内保存有促进卡介苗生物学活性恢复的作用．溶解液内的蛋黄又可 备用。 以作为粘附剂，增强细菌与载玻片的粘附力。从而有效的避免 2．2卡介苗溶液配制及染色取注射用卡介苗两支分别对 细菌在后续的染色和冲洗中脱落。应用碱性美兰复染后它呈 应加入自制溶解液和生理盐水0．5ml，充分溶解后置于37℃ 现出的淡蓝色可以作为背景，便于抗酸细菌的辨别和观察。 温箱内1小时后取出，用微量移液枪抽取3“l卡介苗溶液均 在实际操作中我们临时加入一些非抗酸性球菌和杆菌，使标 匀涂于洁净的载玻片上，干燥固定后严格按《中国结核病防治 本的染色效果接近I临床实际情况，更能调动同学们的学习兴 规划实施工作指南