FKBP38的原核表达、抗体制备及其应用.pdf

·1226· SouthMed 南方医科大学学报U Univ) 2010；30(6) FKBP38的原核表达、抗体制备及其应用 刘安玲1，赵莉2，Ma 1051 of andChemical of 物学教研室，广东广州5 Pittsburgh 5；3DepartmentPharmacology Biology，University School ofMedicine，Pittsburgh，PA15213，USA) 摘要：目的构建人FKBP38N．末端及C．末端原核表达载体并使其在大肠杆菌中高效表达．纯化基因表达产物，制备 兔多克隆抗体并对该抗体用于Western免疫印迹、免疫荧光及免疫组织化学检测进行评价。为研究FKBP38的功能奠 定基础。方法以人FKBP38 FSal (1．207aa)及C．末端(209．387aa)，将扩增产物克隆至大肠杆菌表达载体pGEX．6Pi中，经BamHI双酶切鉴定。 内的定位。结果成功构建FKBP38N-末端及C．末端原核表达载体，表达并纯化了GST．FKBP38．N融合蛋白及 胞株中的表达，特异性强、效价高；用于免疫荧光检测FKBP38在细胞内主要定位于线粒体上；用于免疫组织化学检测 疫荧光及免疫组织化学检测，为深入研究FKBP38的功能奠定基础。 关键词：FKBP38；多克隆抗体；Western免疫印迹；免疫荧光；免疫组织化学 中图分类号：R392文献标识码：A 文章编号：1673-4254(2010)06．1226-04 and ofFKBP38andits Expressionantibodypreparation application LIU An—lin91，ZI-IAOLi2，MADong-zhu3，JIA Min92，WENZhi-hua2，YE Chun-hon92，LI Yong-bin2 1Instituteof of Medical Genetic Cell ofBasicMedical Engineering,DepartmentBiology,2School Sciences，SouthemUniversity, of andChemical of Schoolof Guangzhou510515，China；3DepartmentPharmacology Biology,UniversityPittsburgh Medicine， Pittsburgh，PA15213，USA ToobtainrecombinantN-andC．terminalofFKBP38and anti．FKBP38 for Abstract：Objective prepare polyclonalantibody Western TheN-telminal(1-207 blotting(WB)，immunohistochcmical(IHC)andimmunofiuorescence(IF)analyses．Methods