发光探针-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测人血清蛋白质.pdfVIP

第37卷 分析化学(F王!N=粗HUAXUE) 增刊 2009年10月 ChineseJournal Chemistry B025 ofAnalytical 发光探针．聚丙烯酰胺凝胶电泳检测人血清蛋白质 黄常刚 刘璐 孙斌杰 刘越骊 王珍珍 欧阳津4 (北京师范大学化学学院，北京100875) 人血液组成复杂，其中所含蛋白质种类繁多且在临床检验中具有重要意义。聚丙烯酰胺凝胶电泳 是目前为止普遍使用的分析分离血液蛋白的方法，在血清蛋白质组学研究中是一个非常重要的分离手 段。电泳后血清蛋白的检测方法很多，有考染法、银染法、有机荧光探针法、免疫方法等，但这些方 法中，有的灵敏度低、选择性差、费时费力，有的设备复杂而且昂贵、步骤繁杂，无法在普通的生化 实验室普及。最近我们通过引入有机金属络合物探针发展的化学发光成像法检测血清蛋白质，对传统 的染色法检测不到的低丰度蛋白质能够得到高灵敏度的检测，并且在等电聚焦和二维电泳分析中也可 以应用，取得了很好的效果【ljJ。近年来，量子点在生物物质检测方面获得了广泛应用，具有荧光强度 高，光化学性质稳定，荧光可持续时间长，荧光淬灭作用小等优点，已有应用表明量子点可以同各种 蛋白质结合并且在生物分析和生物技术上有广泛应用。因此，本研究还利用此荧光探针能够同多种蛋 白质结合及其发光特点，在聚丙烯酰胺凝胶电泳后将其应用于血清蛋白质的检测，该方法简便、快速、 灵敏度高，取得了令人满意的结果。 EC3凝胶成像系统，DYY鬲B型稳压稳流电泳仪和DYCZ-21型稳压稳流电泳仪 丙烯酰胺，N，N．甲叉双丙烯酰胺，三羟甲基氨基甲烷，甘氨酸，四甲基乙二胺，过硫酸铵，人血清样 品，硫酸铜，碲粉，氯化镉，巯基乙酸(TGA)，硼氢化钠。 利用聚丙烯酰胺凝胶电泳将血清蛋白分离。 合成铜络合物化学发光探针和水溶性CdTc量子点，并将其用 于凝胶电泳后血清蛋白质的检测。 发光探针法可用于PAGE中检测蛋白质，通过对实际样品—— 人血清的分析可以看出，发光探针法所得到的图像比之考染法具有 背景更低、条带更清晰、分辨率更高、样品区带扩散小等特点，在 检测血清蛋白质时能获得更高的灵敏度和更快的检测速度，于实 (C) (A)03) 际应用中有明显优势。此外，本方法还可用于蛋白质电泳印迹法 图l化学发光探针法(A)、量子 中检测人血清蛋白质，相比于考染法，本方法省去了脱色时间， 点荧光探针法(B)和考染法(c) 且背景低，为电泳印迹之后检测蛋白质提供了一个优越性更高的 检测血清蛋白质的结果比较 新方法。 References l Mo呵ang Chem．，20114，76，(11)：2997-3004 HmngG J’DehgheJR,BaeyensWRl3lDaiZX．Anal 2 WangZZ，Liux，BagyellSWRGDelangheJROuyaag工』ProteomeRes．，2嗍，7，(12)：5075--,5081 3 Tao Q，WangZ 4 2511-2521 5Liu WR J Z J H 13I Z，Liu J，OuyangJ，BaeymsDelangheR,Wang X，Zllang ’E-mail：jmoyang@Imu．讪1．cn 万方数据万方数据 发光探针-聚丙烯酰胺凝胶电泳检测人血清蛋白质 作者： 黄常刚， 刘璐， 孙斌杰， 刘越骊， 王珍珍， 欧阳津 作者单位：