海豚链球菌(Streptococcus+iniae)全细胞灭活疫苗对罗非鱼(Oreochromis+niloticus)免疫保护性研究.pdfVIP

海豚链球菌(Streptococcus+iniae)全细胞灭活疫苗对罗非鱼(Oreochromis+niloticus)免疫保护性研究.pdf

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iniae)全细胞灭活疫苗对 海豚链球菌(Streptococcus 罗非鱼(Oreochromisni劂cus)的免疫保护性研究 王凡 专 业:水生生物学 指导老师:李安兴教授 摘要 对于目前频繁爆发的细菌性疾病,药物治疗有很多弊端,相比而言疫苗接种 对养殖环境和人类健康是安全的,因此被认为是防治细菌性疾病的最重要方法之 一。本研究针对华南地区淡、海水养殖鱼类频繁发生的海豚链球菌病,以其主要 病原海豚链球菌的疫苗为研究对象,主要进行了海豚链球菌的灭活条件研究、疫 苗用菌株的筛选、疫苗用抗原浓度的筛选、罗非鱼对不同佐剂海豚链球菌灭活苗 的免疫应答的研究,为海豚链球菌疫苗的推广和应用奠定基础。 为建立海豚链球菌疫苗的工厂化生产工艺,研究了疫苗的福尔马林灭活条 件,从时间和疫苗的安全性角度来讲,28℃下,0.3~O|5%的福尔马林浓度灭活 菌液是较合适的。这些参数为海豚链球菌灭活苗的大规模生产提供重要理论依 。 据。 对疫苗的免疫保护性的评价主要从疫苗诱导的特异性抗体效价水平(包括用 微量凝集反应、ELISA法)以及鱼体对人工攻毒的相对保护率(relative percent survival,RPS)两方面进行评价。结果表明,抗体效价值与累积死亡率呈显著的 负相关(pO.05)。 剂灭活苗对罗非鱼的免疫效果:免疫组抗体效价显著高于对照组(p0.05),死 亡率显著低于对照组(pO.05);其中淡水株TBY-1免疫组的免疫保护性(微量 免疫组的免疫保护性(微量凝集反应测定最高抗体效价为l:64,RPS为93.6%) 株,可分别用于淡、海水鱼类免疫实验;本研究之后试验均以TBY-1为试验菌 株(HD.I株在海水鱼中的试验由实验室同事完成)。 为制备效果较佳的海豚链球菌疫苗,比较了三种不添加佐剂的海豚链球菌灭 活苗(抗原浓度为1010、i09、ios CFUXmld)对罗非鱼进行一次免疫后攻毒与 两次免疫后攻毒所产生的免疫保护效果。结果表明,免疫一次的三组之间的免疫 效果无显著性差异,能显著高于对照组,但显著低于免疫两次的三组(pO.05)。 64.0%)。 基于不添加佐剂的灭活苗效果欠佳,本研究对佛氏、自油、铝胶、白油+左 旋咪唑(免疫增强剂)四种佐剂苗对罗非鱼的免疫效果进行比较,结果表明,佐 剂组免疫效果显著优于不添加佐剂的六组。其中佛氏佐剂与白油佐剂免疫效果显 著优于其它佐剂组,但佛氏佐剂价格昂贵、有较大副作用,因此认为白油佐剂 海豚链球菌疫苗佐剂之一。 为减少生产时间与开销,本研究还比较了1010、i09、i08CFUXml。1三个抗 原浓度白油佐剂苗对罗非鱼的免疫效果。i09白油组抗体效价(1:1131)低于 死亡率稍高于10加自油组,但无显著性差异,而显著高于ios白油组,相对保 护率达到92.O%。 因此,作者认为i09自油佐剂苗在生产中是最实用,而且又能达到免疫目的 的海豚链球菌疫苗之一. 关键词:海豚链球菌,疫苗,罗非鱼,抗体效价,免疫保护性 n Protectiveimmune ofinactivatedwholecell efficacy of iniaeon vaccine Tilapia Streptococcus (Oreochromisniloticus) FanWang Li Supervisor:ProfAn—Xing Major:Hydrobiology

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