鸭源沙门氏菌灭活疫苗及免疫原性的研究.pdfVIP

鸭源沙门氏菌灭活疫苗及其免疫原性研究 IIIIIIIllIIlllllllll 曹恬雪(预防兽医学) 121269 dO 指导教师：蒋文灿 中文摘要 随着大型集约化养殖业的发展，规模化的养禽生产中常伴有沙门氏菌病的发 生，被感染的雏禽若不加以治疗，重者死亡，耐过者终身带菌，产出带菌蛋，不仅 造成严重的经济损失，对公共卫生的危害也不容忽视。由于耐药性的产生，药物治 疗效果差，可供选择药物的空间缩小。有效的疫苗接种对传染病的预防起着举足轻 重的作用。11前，我国并没有针对鸭沙门氏菌病的标准疫苗。本研究根据川渝地区 鸭源沙门氏菌的血清型分布情况，通过动物攻毒试验进行对比，筛选出一株血清型 分布广且毒力最强的菌株作为研究对象。采用传统方法制备蜂胶灭活疫苗，对试验 鸭进行免疫接种，从细胞免疫和体液免疫两个方面来检测该疫苗的免疫水平，对免 疫效果进行评价，以期为鸭源沙门氏菌病的防控提供参考依据。本文所开展的研究 和取得的结果如下： 1本试验选取了12株鸭源沙门氏菌，在相同菌液浓度下对试验鸭进行分组攻 毒，筛选出死亡率最高、毒力较强的菌株：用30种沙门氏菌诊断血清进行血清型鉴 为lxl08‘47 CFU／ml、109 CFU。将该菌株作为疫苗菌株，研制出三个浓度(108 CFU／ml、1010 CFU／rnl)的蜂胶灭活疫苗；5倍免疫剂量接种试验鸭无异常症状，表明 CFl『／n11、109CFU／ml、1010 该疫苗安全性好；经攻毒保护试验得出108 CFU／ml三个 x1010 浓度组的保护率依次为50％、80％、100％，说明疫苗浓度为1CFU／111l时能起 到很好的保护作用。 抗鸭IgG的最适工作浓度为2．50岭／ml；对鸭抗鸭瘟、多杀性巴氏杆菌、大肠杆 菌、鸭疫里氏杆菌、葡萄球菌及鸭病毒性肝炎病毒等阳性血清检测结果均为阴性； 万方数据 阻断试验结果为阴性：板内和板间重复性试验的变异系数分别为1．10％～2．64％、 1．53％～2．67％。 3本试验利用DSC2013灭活疫苗(浓度为1×1010CFU／m1)免疫接种试验鸭，比 较对照组和免疫组在细胞免疫水平和体液免疫水平上的差异，综合评价DSC2013蜂 胶灭活疫苗的免疫原性： (1)用CCK-8细胞增殖检测试剂盒检测鸭淋巴细胞的体外增殖活性。脾脏淋巴 细胞体外培养，在ConA刺激下免疫组细胞增殖能力明显高于对照组(P0．05)， 二免组增殖能力比一免组高(PO．05)；外周血淋巴细胞分别在ConA和疫苗抗原 的刺激下，二者均能刺激淋巴细胞提高其增殖活性，免疫组的增殖能力明显比对照 组高(PO．05)；结果表明，疫苗免疫可以提高鸭淋巴细胞的体外增殖活性。 d、7d、10d、15d、20d、25 (2)间接ELISA试剂盒检测鸭免疫前、后3 d的 d后呈现出 外周血液中IL一4和IFN．丫的含量。免疫组的IL．4和IFN吖含量在免疫3 d出现波 逐渐升高的过程，与对照组相比差异显著(PO．05)：二免组在免疫后20 峰，明显高于一免组(P0．01)。 d、15d