骨髓间充质干细胞对大鼠钳夹视神经损伤影响的初步探讨.pdf

捅要 Brain 随着社会经济、交通的迅猛发展，颅脑创伤(Traumatic 发生频率逐年增加，极大地威胁人类的生命健康。颅脑创伤的患者大多数为青壮年， 严重影响社会劳动力，给社会和家庭带来沉重的经济、精神负担。 颅脑创伤救治水平的不断提高，人们越来越重视颅脑创伤合并伤的治疗，以降低 其死亡率和致残率，提高患者生活质量。创伤性视神经损伤(traumaticoptic nervous 系统的一部分(centraIsyStem，CNS)，因为对损伤非常敏感，并且缺乏雪旺氏细 胞，自我修复能力较差，是颅脑外伤致残率较高的一个重要原因。视神经损伤患者通 常出现视力减退甚至失明，严重影响患者的牛活、工作、学习等。创伤性视神经损伤 的临床救治尚无统一、疗效确切的治疗规范，是当今医学界研究的热点及难点。本课 题以急性视神经损伤为研究对象，重点研究视神经损伤的病理生理变化及骨髓间充质 干细胞的神经修复功能，主要分为以下五个部分分别进行基础研究和临床观察。 第一部分：视神经钳夹损伤模型建立和病理生理变化 目的：成功建立视神经钳夹损伤动物模型，研究急性视神经损伤后视网膜神经节 伤性视神经损伤的临床治疗和预后判断提供实验依据。 方法：应用外科手术显微镜，经眼入路，充分暴露视神经，使用209动脉瘤夹夹 伤成年SD大鼠视神经9s，共40只，致伤侧作为实验致伤组，对侧为自身对照组。 只实验大鼠均进行术前术后瞳孔直径及对光反射检测和手术前后闪光视觉诱发电位 (F—VEP)的测定，观察波峰振幅和潜伏期。各组动物灌注固定后取视神经和视网膜， 行RGCs计数、HE染色和免疫组化检查。 结果：1、致伤组瞳孔直径平均为3．05±O．32姗，直接光反射消失、间接光反射 灵敏；对照组为O．73±O．12咖，直接光反射灵敏、间接光反射消失。 2、损伤后1w的HE染色，仅见少量炎性细胞，2w可见炎性细胞和少量血管增生， 4w可见大量炎性细胞浸润以及新生血管。 分别下降约5．13％、27．88％、43．91％、60．58％。 4、致伤后，损伤区域GFAP逐渐减退；损伤周围表达量增加，致伤后2w到达高 峰，然后逐渐下降。 结论：视神经钳夹损伤模型稳定性高、易操作、重复性好，可在实验室内完成： 此模型能够有效的模拟临床上创伤性视神经损伤的病理牛理变化和临床症状。 第二部分：骨髓间充质干细胞的分离、鉴定和干细胞支 架的构建 目的：分离、纯化、培养骨髓间充质干细胞并予以鉴定；构建骨髓间充质干细胞 植入支架。 方法：1、取大鼠股骨，使用PBs冲洗出骨髓，离心并使用贴壁筛选法分离纯化 骨髓间充质干细胞，并将其传代培养。运用流式细胞仪检测骨髓间充质干细胞的阳性 人工合成胶原蛋白为原料制作视神经鞘管，孔隙大约为150帅。细胞传代后，将视神 经鞘管放入细胞悬液中培养24h后激光共聚焦观察。 结果：1、骨髓间充质干细胞易于传代培养，流式细胞仪检测的结果，CD44、CDl05、 共聚焦显示视神经鞘管上满布骨髓间充质干细胞。 结论：运用大鼠骨髓腔易提取骨懿间充质干细胞，且其纯度较高；以视神经鞘管 为基础，成功制备植入支架，能够生长大量骨髓间充质干细胞。 第三部分：骨髓间充质干细胞对视神经损伤的视网膜节 细胞数量的影响 目的：探讨骨髓间充质干细胞对视神经损伤视网膜节细胞的影响，以及其RGCs 的动态变化。 方法：以大鼠视神经钳夹伤模型为实验对象，随机分为骨髓间充质干细胞治疗组、 磷酸缓冲液(PBS)治疗对照组和空白对照组(损伤后不予以治疗)，每组各20只。 视神经损伤后3d分别植入富含骨髓间充质干细胞或者磷酸缓冲液的视神经鞘管于损 伤部位。治疗后3d、1w、2w、4w，取材行RGCs计数并比较三组之间差异。 9、131±12；空白对照组分别为225±12、201±10、176±6、12l±6。 2、磷酸缓冲液组与空白对照组之间各亚组之间的RGCs的计数均无明显差异。 3、骨髓间充质干细胞治疗组和磷酸缓冲液治疗组或空白对照组之间，在治疗后 差异，PO．05。 结论：骨萌间充质干细胞的移植可以减缓视网膜节细胞的凋亡，具有一定RGCs 保护作用，抵抗凋亡。 ·2． 第四部分：骨髓间充质干细胞对视神经损伤的病理结构 的影晌