清开灵有效组分对脑缺血损伤神经元的保护机制及研究.pdf

中文摘要 由血栓急性阻断脑血流供应而引起的缺血陛脑中风已成为当今第三大致死原因及首位致 残原因。溶栓恢复脑血供及神经保护是治疗缺血性脑中风的两种主要策略。溶栓治疗是目前 临床的主要方法，但往往受到治疗时间窗的限制(一般认为3小时以内)，且副作用较多。越 来越多的证据表明，缺血性脑损伤后，除了存在一种主动性的程序性细胞死亡阴亡)过程外， 在耐受细胞内还存在一种平行的主动性神经元存活过程，这两种相反的级联过程均由基因表 达调控。在神经元生存机制中，与神经元的存活有密切关系的，如神经营养因子和神经保护 因子等，本篇以脑缺血过程中神经元保护机制的研究为切入点。 脑缺血的病理生理是一个多环节、多因素、多途径损伤的酶促级联反应，西医单纯干预 其中某一环节或途径单一的治疗，经临床证实疗效甚徽。中医学具有整体观念的特点，中药 又具有复方特征，从研究看其可以作用于多环节相关靶点，从而干预脑缺血损伤病理过程。故 从中医药寻求防治脑缺血的有效措施和治疗药物，是人们关注的课题。 目前中药脑保护研究多集中在益气活血、开窍醒神、补益肝肾、化痰通络等方面，中药 复方制荆的疗效没有明确肯定。通过运用中医辨证论治与有效生亿指标结合，深入探讨脑保 护研究的疗效问题。前期实验研究发现，清开灵有效组分主要是黄芩苷、栀子苷、胆酸、珍 珠母等，具有解毒通络、开窍醒神等功效，研究该药对脑缺血后的神经营养因子和神经保护 因予的影响，探讨清开灵有效组分治疗脑缺血的疗效并阐明其保护机制，为中医药治疗脑缺 血提供现代科学依据。 1研究方法与结果 本实验参照Lortga法，成功复制出大鼠脑缺血模型。将大鼠按缺血两个时段分为模型组、 给药组(黄芩苷、栀子苷、胆酸，珍珠母及四者配伍合方组)及假手术组，两个时段为12 小时及24小时。除暇手术组外，余各组造模前1小时均给药一次，前期实验证明各给药组之 间动物模型神经功能评分经统计学处理无显著性差异。各药物治疗组分别腹腔注射相应药物， 12小时时段组第二次给药时，与第一次给药间隔4小时：24小时时段组第三次给药时，与第 二次给药间隔12小时。采用酶联免疫吸附双抗体夹J心法(ELISA源理捡测缺血脑组织bFGF、 I、 II的表达部位。 TGF-[3R 结果表明，黄芩苷能够诱导缺血脑组织bFGF含量表达上调，合方、栀子苷、珍珠母却 显著抑制其表达，与模型组相比，其差别有显著统计学意义(po。01或po．05)。珍珠母、 黄芩苷、胆酸可诱导缺血脑组织BDNF含量表达上调，与模型组比较，其差别有显著统计学 意义(p0．05)。合方、黄芩苷可诱导缺血脑组织HSP70含量表达上调，与模型组比较，其 差别有极显著统计学意义(po．01)。在缺血早N02h)，珍珠母和黄芩苷以及合方有抑制合成 TGF-p的作用；缺血24h，珍珠母却有诱导缺血脑组织TGF-p的表达增加，其差别有显著统 计学意义(p0．05)。综上，清开灵有效纽分可能进一步诱导缺血区神经营养因子及神经保护 因子表达上调，从而证明神经营养因子及神经保护因子对局部缺血缺氧的神经元有保护作用， 并且相互之间有协同作用，在脑缺血损伤的发生、发展、抗损伤的修复中发挥着重要作用。 免疫组化结果显示：清开灵有效组分在缺血不同时段可以上调Tr／d3和TGF-p褶应受体 的表达，其表达趋势与定量分析是一致的。 2结论 通过上述结果得出以下结论： 2 (1)脑缺血损伤使血清NSE含量显著增如，胆酸、珍珠母及四者配伍合方在缺血l 小时能有效抑制神经元NSE的释放，可以认为胆酸、珍珠母及合方在脑保护中发挥主要作用。 至缺血24小时，血清NSE水平没有降低。推测清开灵的不同组分对神经元的保护作用在 12小时和24小时两个时段作用上有一定差异。 (2)在缺血12小时，黄芩苷、胆酸和珍珠母可以诱导许多神经营养因子合成增加，其 的表达上调。在缺血24小时只有黄芩苷增加bFGF和BDNF的表达，从而对神经元起保护 和营养作用，胆酸和珍珠母则不发挥作用。 (3)黄芩苷、珍珠母及合方在缺血12小时可抑制转化生长因子．D(TGF-B)的表达， 至缺血24小时珍珠母和胆酸则上调TGF—p，由此推测清开灵有效组分在不同时段其脑保