生长激素释放肽Ghrelin在三磷酸腺苷依赖蛋白酶介导自发糖尿病大鼠心肌的保护效应中作用机制.pdf

·中文论著摘要· 生长激素释放肽Ghrelin在三磷酸腺苷依赖蛋白酶介 导的自发糖尿病大鼠心肌保护效应中的作用机制 刖 看 现有的研究提示，糖尿病心血管病并发症的发病机制可能有多种因素通过多 种途径参与。糖尿病引起的内皮功能异常、胰岛素抵抗、心肌代谢异常是糖尿病 心肌重构和心肌舒张功能障碍致心功能不全的始动环节。AMP依赖蛋白激酶 (AMPK)，因可能通过多种途径参与保护心血管效应而受到越来越广泛的关注。 目前认为AMPK是胰岛素敏感性的一种正调节因子，它不仅参与细胞内脂肪酸氧 化代谢，还可通过调节GLUT4和mTOR的表达影响心肌细胞的糖代谢以及蛋白质 合成。 近年来，Ghrelin的心脏保护作用逐渐被人们重视，尽管作用机制仍在探讨之 中，但其在心血管系统的作用成为目前研究的热点。Ghrelin在体研究表明，下丘 脑内注射外源性Ghrelin，可以通过激活AMPK调节机体的能量代谢；细胞水平的 研究表明，Ghrelin可以通过激活AMPK改善血管内皮细胞的氧化应激。总之， 越来越多的科学研究表明，Ghrelin可能与细胞代谢的关键酶AMPK有着密切的联 系。 本研究应用外源性的Rat．Ghrelin注射于大鼠腹腔，观察其对大鼠心脏功能、 血糖血脂代谢、心脏病理结构的影响，系统评价Ghrelin对自发性糖尿病人鼠的干 预作用：采用分子生物学方法，观察Ghrelin对糖尿病大鼠心肌代谢关键酶AMPK 确切的心血管效应及其可能的分子机制，为临床防治代谢综合征提供新的理论依 据和治疗靶点。 材料与方法 一、实验材料 Wistar SPF级12周龄雄性GK大鼠(Goto．Kakisakirats)24只和SPF级12 周龄雄性Wistar大鼠8只，购于上海斯莱科实验动物有限责任公司。分组干预4 周后取血，并采集心肌及胸主动脉标本。GhrelinELISA试剂盒购于南京生物技术公 购于上海SiroccoPharmaceutic公司． 二、实验方法 大鼠编号随机分为4组：Wistar组：蒸馏水灌胃4周；GK组：同等容量蒸馏 200肛g／kg／d腹腔注射4周。检测各组大鼠血糖、血脂、胰岛素、内皮素、一氧化 氮、肿瘤坏死因子．仅、Ghrelin等生化指标。12导生理记录仪测量左心室收缩压、 左心室舒张末压、左心室压力最大上升速率、左心室压力最大下降速率。采用 Masson特染技术以及免疫组化技术对各组大鼠心肌、胸主动脉的组织超微结构和 病理学检查。Westernbolt方法检测各组大鼠心肌、胸主动脉组织mTOR蛋白、 mTOR蛋白、AMPK，GLUT4基因表达。 三、统计学处理 计量资料以均数4-标准差(X士s)表示，所有的数据均通过SPSSl3．0处理。 对于正态分布的变量采用方差分析进行多组间比较，方差不齐者用秩和检验，采 用t检验进行两组间比较；非正态分布的变量经对数转换后采用t检验。以PO．05 为差异有统计学意义。 实验结果 一、各组大鼠体重及Lee指数比较 实验干预因素处理前，四组大鼠体重无统计学差异俨0．05)；实验4周后， 大鼠体重增长最缓慢，接近于正常对照组。所有自发性糖尿病大鼠的Lee指数在 2 实验干预因素处理前，均高于Wistar组大鼠俨O．05)；实验4周后，二甲双胍组 0．05)。 二、各组大鼠收缩压变化 实验干预因素处理前，所有自发糖尿病大鼠血压均高于Wistar大鼠妒0．05)； 收缩压仍显著高于Wistar大鼠，较GK组的收缩压水平略低，但差异不显著(尸 0．05)。 三、各组大鼠糖脂代谢相关指标的比较 四、各组大鼠内皮功能相关指标的比较 五、各组大鼠血流动力学指标的变化 明显差异fPO．05)。 六、大鼠心脏HE染色及心肌Masson染色 3 Wistar组大鼠心肌纤维无肥大，细胞核呈圆形或椭圆形，据于细胞中心，心 肌I’日J质结构正常。GK组大鼠心肌细胞肥大、深染，心肌细胞边界不清，细胞核大 小不均匀，心肌Masson染色提示心肌间质增生；Ghrelin干预后，光镜下心肌细胞 形态基本完整，无肿大，Masson染色