瘤内注射抑制miR-21的质粒促进敲低stat3的DC疫苗的抗肿瘤活性.pdf

目 录 中文摘要……………………………………………………………………．．1 英文摘要……………………………………………………………………．．4 研究论文 抗肿瘤活性 前言……………………………………………………………………………………………．8日lJ舌……………………………………………………………………………………………．芍 材料与方法……………………………………………………………．．9 结果……………………………………………………………………………………………．18 附图……………………………………………………………………．．20 讨论……………………………………………………………………………………………．31 结论……………………………………………………………………………………………．33 参考文献…………………………………………………………………34 综述改善肿瘤微环境提高肿瘤DC疫苗抗肿瘤活性的研究进展……．．37 致谢…………………………………………………………………………．．57 个人简历……………………………………………………………………．．58 中文摘要 的抗肿瘤活性 摘 要 目的：树突状细胞(Dendritic T 有效诱导初始T细胞(Naivecell)活化，促进细胞毒性T淋巴细胞 T cells，Th)的 (cytotoxiclymphocytes，CTL)和辅助性T细胞(Thelp 分化。因此，越来越多的研究者正试图利用DC疫苗来治疗包括肿瘤在内 的多种疾病。随着对DC疫苗研究的深入，发现肿瘤DC疫苗的免疫效应受 TGF．D等多个靶基因的调控，参与肿瘤微环境的调节。 本研究首先制备敲低stat3的肿瘤DC疫苗，利用乳腺癌荷瘤小鼠模型， 疫苗的制备及应用提供实验依据。 方法： 1制备敲低stat3的DC疫苗 用mGM—CSF和mlL一4诱导DC细胞分化。 细胞株，按照试剂盒说明书进行慢病毒包装。用新鲜的病毒液感染体外培 养第4天的DC细胞。 此得到了敲低stat3基因的肿瘤DC疫苗。 和总蛋白，通过real-timePCR和western 的表达。 中文摘要 3敲低stat3基因的DC疫苗活性检测 lc 和PE标记的抗小鼠CD86、MHCII及ICAM．1抗体，流式细胞仪分析 CDl lc+细胞的表面标记MHCII、ICAM．1及CD86的表达情况。 70的含量。 养上清，用ELISA法测定培养上清中IL—12p40／P (1)建立小鼠乳腺癌荷瘤模型：将4T1细胞经皮下接种给雌性、7—8 周balb／C小鼠(6只／组)。待肿瘤块体积达到200mm3，瘤旁注射携带抑 (2)观察肿瘤生长：接瘤后每天观察肿瘤生长情况，并每隔3天用游 标卡尺测量肿瘤块的直径，按公式(长径×短径2)／2计算肿瘤块的体积 (mm3)，并绘制肿瘤生长曲线。 (3)抑制肿瘤miR-21表达联合敲低stat3的DC疫苗对乳腺癌荷瘤小鼠 脾脏淋巴细胞功能影响 末次DC疫苗免疫后的第7天，处死荷瘤小鼠，流式细胞仪分析产生 检测脾脏细胞毒性T淋巴细胞的溶细胞活性(CTL) 结果： 1通过细胞转染的方法，从四个携带抑Nstat3表达的质粒中筛选出对 stat3抑制效率最高的质粒。 白水平降低70％，mRNA水平下降30％)。 3与对照组比较，敲低stat3的DC细胞的ICAM．1、MHCII及CD86的 表达明显增加，且促进IL．12的分泌。 长；提高小鼠脾淋巴细胞IFN-丫的产生和CTL活性。但对荷瘤小鼠脾脏 T