一株抗肿瘤新城疫病毒的全基因组测序及其毒力测定.pdf

目 录 目 录 中文摘要…。．……………………………………………………………．1 英文摘要…………………………………………………………………3 英文缩写…………………………………………………………………6 研究论文一株抗肿瘤新城疫病毒的全基因组测序及毒力测定 —1上一—jl‘ 且¨ 舌………………………………………………………………9 材料与方法…………………………………………………………11 结果………………………………………………………………28 附 图………………………………………………………………35 附表………………………………………………………………50 讨论………………………………………………………………57 结论………………………………………………………………63 参考文献……………………………………………………………64 综 述新城疫病毒用于联合抗肿瘤的研究进展…………………70 致 谢…………………………………………………………………84 个人简历…………………………………………………………………85 中文摘要 一株抗肿瘤新城疫病毒的全基因组测序及毒力测定 摘 要 disease 新城疫病毒(newcastle virus，NDV)为单负链不分节段的 RNA病毒，属于副黏病毒属。近些年来，NDV的宿主范围不断扩大， disease，ND)， 可感染多种家禽和野生鸟类，引发新城疫(newcastle 而人类对NDV的感染率极低，主要表现为流感样症状。NDV对肿瘤 细胞的特异性杀伤能力已经使其成为抗肿瘤生物制剂的研究热点。目 前，越来越多的NDV株已被证明能够高效抗肿瘤，而对于同一种肿瘤 细胞，不同NDV株的杀伤能力却不同，这可能与病毒间的基因组序列 差异密切相关。同时，NDV的抗肿瘤机制研究越来越需要将病毒基因 组序列与NDV诱导的肿瘤细胞凋亡信号通路联系起来。本实验室保存 一株抗肿瘤NDV——Ⅷ3舭SRC／F3，其抗肿瘤机制己被初步探索， 本实验将测定期3NU／LSRC／F3的毒力及其全基因组序列。 之后设立空白对照组、阴性对照组(灭菌生理盐水)、阳性对照组 deathtime (Mukteswar)及实验组，最后测定鸡胚平均致死时间(mean of pathogenicity index，ICPI)及静脉致病指数(intravenous index，IVPI)。 pathogenicity 在全基因组测序部分，首先通过试剂盒提取病毒基因组RNA，之后利 段的扩增，扩增片段之间部分重叠，且拼接后覆盖整个基因组。对于 基因组的两末端，采用锚定引物及特异性引物，通过简化的cDNA末 ofcDNA end，RACE)而获取相 端快速扩增技术(rapidamplification 应的扩增片段。所有扩增片段在电泳鉴定后被送往北京华大公司进行 纯化后测序，并通过生物信息学软件处理测序结果和进行序列分析。 结果显示耶NU／LSRC／F3的MDT为105．6h，ICPI为O．26，IVPI 为0，这些致病指数均在弱毒株范围内，故HBNU／LSRC／F3为弱毒株。 但经序列对比及分析后发现，HBNU／LSRC／F3