人神经营养素3基因重组慢病毒载体的构建与鉴定.pdfVIP

第43卷第6期 温卅I医学院学报 V01．43NO．6 2013年6月 JournalofWenzhouMedical Jun．2013 College ll 人神经营养素3基因重组慢病毒载体的构建与鉴定 袁健东1，郎俊哲1，沈翠华1，傅强2 (1．温州医学院附属第一医院骨科，浙江温州325000；2．第二军医大学附属长海医院骨科，上海 200433) [摘要]目的：构建携带人神经营养素3(hNT3)基因的重组慢病毒表达载体。方法：通过双限制性内 切酶消化和连接的方法构建pGC—E1一hNT3一EGFP质粒，将该质粒转化大肠杆菌DH5仅，通过PCR、酶切、测序 和对比验证hNT3，通过Lipofectamine2000将pGC—E1一hNT3-EGFP、pHelperI．0和pHelper2．0三质粒 系统共转染293T细胞包装病毒，经大量扩增后，应