NMDA受体亚单位装配、运输以及膜表面表达的分子机制.pdf

中文摘要 捅螫 NMDA受体属于离子型谷氨酸受体，它在突触传递，突触可塑性及若奋性 毒性中都扮演着重要的角色。与其它非NMDA受体不同，功能性NMDA受体 主要是由NRl和NR2亚单位装配而成的异聚体，而单独在异源系统中表达的受 体亚单位大部滞留在ER，不能在质膜上表达．其中，NRI亚单位有八种剪接变 体，是形成功能性NMDA受体通道的必要成分，NR2亚单位包括NR2A．NR2D 四个相关基因，不同的NRI亚单位剪接变体和不同的NR2亚单位决定了受体不 同的通道性质。这种亚单位组成的差异形成了NMDA受体的功能异质性，并很 大程度上成为NMDA受体多样而复杂的生理功能的内在结构基础。尽管目前的 研究已经让人们很好地了解了台不同亚单位的NMDA受体的功能特征，但是这 种功能特征的内在结构基础，特别是对于NMDA受体是如何实现亚单位特异性 装配，如何通过ER质控等受体早期发生事件的内在机制还不是非常清楚。有研 究提示，NRI的c末端有决定ER滞留的RXR基序，只有与NR2亚单位共表 达才能掩盖此基序并表达在细胞膜上．但是NR2亚单位当单独在异源系统中表 达时也是滞留在ER，不能表达到细胞膜上，它的ER滞留机制目前并不清楚。 另外，来自AMPA和KA受体的研究提示，离子型谷氨酸受体亚单位的装配是 二聚体的二聚化这样一个过程，即亚单位先形成同二聚体，然后同二聚体之间 再装配成异四聚体，其中，AMPA和KA受体亚单位的ATD决定了同二聚体的 形成．sl，跨膜区以及s2区参与了异聚体的装配，截短再连接实验同样提示 NMDA受体的装配也是二聚体的二聚化这样一个过程，但是决定NMDA受体亚 单位装配的区域并不明确。有研究提示NRI亚单位的ATD对形成功能性受体是 必须的，而NRI亚单位的整个N末端参与了受体亚单位的装配，但是也有研究 提示缺失了ATD的NR2亚单位可以与NRI亚单位形成功能性受体。因此对于 NMDA受体N末端在受体装配中的作用也不是非常清楚。 为了更好地探索这些科学问题，我们首先将一种生物物理的方法一荧光共振 能量转移(fluorescencer∞∞an∞energy 中文摘要 配的研究中。因为FRET技术可以实时观察活细胞内的蛋白之间的相互作用并且 被广泛应用于多种受体装配．构象改变等研究中。我们的结果显示，当Nglg NRZA,NR2B亚单位单独在HEK293细胞中表达时，可咀各自形成同二聚体，当 与其它亚单位共表达形成NMDA受体时。这些同聚体仍然存在。这一结果也进 一步支持NMDA受体的装配是一个二聚体的二聚化过程，同时，通过推算 FRmax，我们发现NR亚单位同二聚体的N端构象在形成功能性受体的前后是 发生变化的，特别是对于NRla亚单位，其同二聚体的N端构象会因与其配对 的NR2亚单位的不同而发生不同的改变。而利用不同N端结构域缺失的手段我 terminus，NT)，即N端大 们发现，在HEK293细胞内，即便整个N末端(N 约前550个氮基酸都缺失，NR亚单位在ER内也能形成同聚体或彼此之间形成 异聚体。这就提示NT对于NMDA受体亚单位之间的装配不是必要条件。结合 活细胞表面染色和电生理的方法，我们还发现，截掉NR亚单位的氨基酸末端区 域(amino．ttaminal NK2B亚单位仍然可以与野生型盼NRIa亚单位形成表面表达的功能性受体。但 是对于截掉ArID的NRIa亚单位来说，它只能与全长的NR2B亚单位形成功能 性受体，但是不能与全长的NR2A亚单位形成功能性受体。如果将NR2A与NR2B 体却不能与缺失了ATD的NRla亚单位共同表达在细胞膜上，而是都滞留在ER， NP．2A的AID这种ER滞留作用才能被掩盖。 关键词：NMDA受体，FRET，装配，运输，内质网 2 英文摘要 Abstract tothe N-methyI—n-aspartote(NMDA)receptors，whichbelong ionotropio roles