血管内皮生长因子对血肿瘤屏障通透性的影响及作用机制初探.pdfVIP

开放血肿瘤屏障的机制，为脑胶质瘤等中枢神经系统疾病的治疗提供新途径。 方 法 1、大鼠C6胶质瘤细胞的培养和C6脑胶质瘤模型的制备。 2、应用伊文氏兰的渗透评估VEGF作用前后C6脑胶质瘤大鼠血肿瘤屏障通 透性的变化。 3、应用透射电镜技术检测C6脑胶质瘤大鼠血肿瘤屏障BMECs中吞饮小泡 数量的变化。 4、应用免疫组织化学法检测VEGF作用前后C6脑胶质瘤大鼠脑肿瘤组织微 血管中caveolin．1和caveolin．2的分布和表达水平变化。 5、应用westernblot法检测VEGF作用前后C6脑胶质瘤大鼠脑肿瘤组织微血 管中caveolin．1和caveolin．2的蛋白表达水平变化。 结 果 l、成功建立了大鼠C6脑胶质瘤模型。 2、分别给予剂量为0．01 ng／g、O．05ng／g、0．1ng／g、0．2ng／g和O．4ng／g的 VEGF，当VEGF剂量为0．05 ng／g时，C6脑胶质瘤大鼠血肿瘤屏障通透性显著增 加。 3、给予0．05 VEGF后，C6脑胶质瘤大鼠血肿瘤屏障通透性增加，在VEGF ng／g 作用45min时增加最显著，以后逐渐恢复，在VEGF作用120min时恢复到未给 药时水平。 4、C6脑胶质瘤大鼠血肿瘤屏障BMECs中吞饮小泡的数量很少，给予0．05 ng／g min时明显减 VEGF作用45min时，吞饮小泡数量明显增加，在VEGF作用120 少。 5、给予0．05 和caveolin．2的蛋白表达水平增加，二者均在VEGF作用45min时达峰值，以后 逐渐降低，在VEGF作用120min时降到给药前水平。 讨 论 我们的研究证明， VEGF作用后C6脑胶质瘤大鼠BTB的通透性显著增加， eaveolin．2的表达水平显著高于对照组，在VEGF作用45min时达峰值。上述结 果说明，VEGF能够通过增加吞饮小泡数量的跨细胞途径增加BTB的通透性。 血管内皮生长因子是首先被描述为来源于肿瘤具有很强的增加内皮细胞通透 性的细胞因子，它是目前已知作用最强的促血管生成因子。许多研究表明适当剂 量的VEGF能够有效地增加BBB和BTB的通透性。我们应用伊文氏兰的渗透评 估BTB的通透性变化时发现，VEGF剂量为O．05 ng／g时，C6脑胶质瘤大鼠BTB 的通透性显著增加；并且在VEGF作用45min时达峰值，以后逐渐恢复，在VEGF 作用120min时恢复到未给药时水平。许多研究者的研究结果与我们的结果相一 致。但是关于VEGF究竟是通过细胞旁途径还是跨细胞途径增加BTB的通透性目 前还不是很清楚。研究认为，VEGF可选择性直接作用于血管内皮细胞膜上的III vacuolar 型酪氨酸激酶受体，通过介导形成跨细胞间隙、小泡囊状细胞器(vesicular 子物质可在VEGF的作用下，通过细胞质膜微囊细胞器进行转运。我们应用透射 电镜观察VEGF对C6脑胶质瘤大鼠血肿瘤屏障超微结构的影响时发现，C6胶质 瘤移植大鼠血肿瘤屏障BMECs中吞饮小泡的数量很少，给予0．05VEGF作 ng／g 用45rain时，吞饮小泡的数量明显增加，在VEGF作用120min时明显减少。 有研究证明，VEGF与血管内皮细胞吞饮小泡和窗孔形成有关，但是其介导 吞饮小泡和窗孔形成和保持的机制尚未明了。跨细胞途径主要通过细胞表面的 在调节囊泡运输中起重要作用，它可以通过控制信号分子的活性和定位调节囊泡 的分裂、内吞、融合和胞吐作用。为了进～步弄清VEGF增加吞饮小泡数量的机