嫁接及其接合部变异与研究.pdf

摘 要 嫁接作为一项农业生产技术，已被广泛应用于农业、林业以及园艺植物生产中。 同时，它又是一种科研的方法与手段。自上个世纪初开始至今，特别是70、80年代， 对嫁接基础理论进行了大量研究。但有关嫁接机理方面的许多问题仍然不太清楚，如 砧穗产生的愈伤组织在愈合过程互相抱合时，有无细胞融合现象，两者的愈伤组织接 触和混合以后，相互之间的影响如何等，这些推断至今都因没有确切的遗传学证据而 未得到证实。 植物通过嫁接，能够产生变异，这已为人们所共知，并已被用于育种实践之中， 如嵌合体，远缘嫁接有性杂种等，但是，至今，还未见嫁接接合部细胞发生遗传变异 的报道。 为此本研究针对这些问题，以番茄、茄子和黄瓜为材料，从生物化学、组织学、 细胞学以及分子生物学水平上对嫁接及其接合部细胞间的相互作用进行研究，旨在阐 明嫁接接合部细胞是否有遗传变异的发生。 主要研究结果如下： 1通过试管内外嫁接对影响番茄、茄子及黄瓜嫁接成活率和接穗生长的影响因子 进行了研究，其中包括嫁接组合、苗龄、砧木子叶以及外源激素。结果表明：在试管 内嫁接中，以顶接珐、苗龄为7d的番茄作为砧木有利于提高嫁接成活率和接穗生长； 保留砧木子叶有利于提高嫁接成活率，但其萌发的腋生芽对接穗生长不利；适当的外 源激素处理接穗和添加到培养基中可以提高嫁接成活率；番茄或茄子与黄瓜的嫁接成 活率较低，茎尖生长缓慢。在室外嫁接中，以劈接方式嫁接，其成活率更高，接穗生 长最快(15．7cm)；以相同的嫁接方式，互为砧穗的两组合的嫁接成活率和接穗生长 表现出明显差异。 2用光镜和电镜对离体嫁接的亲和性嫁接组合(茄子／番茄)和非亲和性嫁接组合 (茄子／黄瓜)进行了系统的组织学和细胞学比较观察。结果表明，嫁接的早期阶段， 均能形成隔离层并在切口面上产生愈伤组织，新的细胞核和叶绿体逐渐形成。后期， 亲和性组合隔离层逐渐消失，砧木和接穗间维管束贯通且隔离层中有次生胞I刚连丝的 形成：非亲和性嫁接组合中，隔离层不消失，砧木和接穗间无微管束桥相连，也无次 生胞问连丝的形成；在两组合中，均观察到细胞核变形、解形等现象，这表明接合部 细胞可能会发生细胞重建，从而导致细胞变异的发生。此外，还采用荧光染料对嫁接 接合部发育的观察，但由于它们均发蓝色荧光，因此不能直接观察接合部细胞问有无 细胞融合的发生。 3通过茄子／番茄离体嫁接对嫁接体发育中的蛋白质含量、POD、SOD及CAT同工 酶进行了研究，结果表明可溶性蛋白质含量与POD及SOD活性变化趋势一致，表现为先 增后降的趋势，在嫁接后6d活性最强，而CAT活性与此相反，表现出先降后增的趋势， 带数的逐渐增加，表明嫁接接合部可能发生了变异。 4通过对番茄和茄子异种嫁接接合部组织染色体的鉴定，发现番茄与茄子嫁接接 合部产生了倍性变异，出现了非整倍体和多倍体组织(2n=24、40、48、84)。 5通过番茄同种自体嫁接以及番茄和茄子异种嫁接接合部组织间的PCR扩增体 系的建立试验和RAPD分析，结果表明，最优反应体系为25p1反应体系中，模板DNA 叶 接合部组织的RAPD分析，发现嫁接接合部出现了特征带，而在异种嫁接接合部有供 体特征带丢失。 6进行了嫁接接合部组织的植株再生及其鉴定。在试管内外嫁接中，通过外力去 除接穗，均能使嫁接接合部组织分化出不定芽。从形态上观察，个别不定芽产生了变 mgjLNAA两个培养基 上分化的芽出现了变异，其变异率为3．33％。将嫁接接合部组织刮下接种在含有0．5 mg／L6-BA，1．0 使愈伤组织增殖。接种在含有2．0 基上，可以分化出芽，且从分化的芽中，获得了变异植株。 总之，本研究的结果表明，在嫁接接合部发生了遗传变异，嫁接接合部组织可 作为遗传变异的来源，嫁接可作为一种很有潜力的育种方法。 关键词：嫁接接合部遗传变异 Abstract and