苦瓜花药培养愈伤组织诱导和分化及研究.pdfVIP

摘 要 本研究采集四川广泛栽培的4种基因型的苦瓜杂种(FI代)的花药为培养对象， 对影响苦瓜花药培养的诸因素进行了较系统的研究，主要结果如下： (1)苦瓜花蕾长度、花药呈现的颜色均和小孢子的发育时期存在相关性。应当 以花蕾长度、花药颜色的双重标准衡量小孢子的发育时期。。当花蕾长度为4—5mm， 花药颜色为青白至微黄时，小孢子发育时期为单核期。 (2)从供试的4种基因型看，冷处理(40C，黑暗)对诱导率的提高不是绝对的， 甚至还会极大降低个别基因型的诱导率，但是从诱导出的愈伤组织质地看，经冷处理 的花药所产生的愈伤组织均一性明显好于没有经过低温处理的。苦瓜最适合的冷处理 时间是2．3天，超过4天诱导率极低。 mg·L。)、低浓度的2，4一D (3)在MS(309蔗糖)培养基上，仅用2，4．D(O．1 (0．1 mg·L以)与BA各水平的组合、低浓度BA(0．2nag·L_)与2，4一D各水平的组合， 均不能很好地让苦瓜花药长出愈伤组织；2，4一D的诱导效果好于NAA；4个基因型均 0，5 2．0 以2，4．D mg·L．1+6-BAmg·LJ的激素组合诱导率最高。 (4)随着培养基中添加的蔗糖浓度从309上升到909，苦瓜花药愈伤组织的诱 导率显著降低，而愈伤组织发生经历时间变长。较高浓度蔗糖可以显著抑制花药壁发 生愈伤组织，当培养基中添加709蔗糖时，既能保证较高的诱导率，又能较好地抑制 花药壁发生愈伤组织。 (5)培养温度和光周期对苦瓜花药愈伤组织诱导的影响较大。黑暗利于愈伤组 织的启动，光照利于愈伤组织的生长；温度越高，愈伤组织诱导率较高，但质地较差。 ‘胖妞’在配方为MS+TDZ 0．5mg·L。+2，4一D0．5mg·L4+6％的蔗糖十0．68％琼脂的 培养基上(黑暗，220C)继代一次后，少部分愈伤组织转变为胚性愈伤组织。 (6)‘九杂翠绿’不同花色、不同花蕾长度、不同小孢予发育时期的愈伤组织诱 导率能够很好匹配。并以此推测出单核中后期与双核早中期的愈伤组织诱导率为 59％一63％和33％一36％。 (7)‘九杂翠绿’的花药在培养基上的接种方式不同，愈伤组织诱导率显著不同。 愈伤组织诱导率从高到低的接种方式依次是：直立方式(71．43％)、平躺(62．50％)、 织诱导率没有显著差异，但二者均显著高于末花期的愈伤组织诱导率。主蔓上采集的 花药，愈伤组织诱导率最高，侧蔓高位和中位没有显著差异，侧蔓基位愈伤组织诱导 率最低。 (8)诱导阶段得到的愈伤组织按照外观和质地划分，主要有4类：第一类为半 透明、晶莹、球状颗粒、致密脆硬，表面有刺状突起；第二类为黄白色、致密块状颗 粒；第三类为白色不透明瘤状，体积大，表面相对光滑；第四类为分散性、均一性、 通透性均较好的胚性愈伤组织。 (9)分化过程中，4种基凶型都没有能够分化出胚状体和再生植株。但是，‘九 0．05 杂翠绿’在激素组合为ZT 0．05 ‘胖妞’在KT0．1 mg·L。+NAA mg·L一， mg·L。1 +NAA0．05 0．2 mg·L。的培养基上均分化出了根。而‘碧秀’在激素组合为IBA mg·L。 +6一BA3．0 mg·L以的培养基上分化出了绿色竖状突起。 (10)本次实验得到的不定根中，‘胖妞’分化出不定根26条，根尖细胞染色体 观察证实，其中4条为单倍体根，单倍体分化率为15．44％，其余为混倍体。 关键词：苦瓜(Momordicacharantia三．)；花药培养；愈伤组织诱导；单倍体 Di I