六株细脚拟青霉原生质体制备和染色体核型及研究.pdf

摘要 本文对5株来自不同产地的细脚拟青霉的产孢条件、最佳酶解条件、原生质体制 备工艺和6株菌株脉冲电泳条件进行了研究，主要结果如下。 不同的菌株在不同的培养基、不同温度下培养2周后，产孢量和菌丝生长量都 有显著差异，最佳产孢光照时间也各不相同，实验的结果为：ptl65在查氏培养基 上，27℃中黑暗培养产孢最好：pt173的产孢量和菌丝量的最佳条件可选取在PDA 好。 菌丝获取方法的不同会对菌丝酶解效果产生很大的影响，结果表明：选取液体 种子转接入新鲜的培养基中，萌发一段时间后摇瓶中的菌丝生长阶段不一致，造成 同样酶解时间下原生质体量的不同，使后续的实验难以进行。取长势一致的孢子悬 浮液接入液体摇瓶中，孢子萌发情况一致，酶解效果很好，且实验也容易定量控制。 不同的菌株孢子萌发时间也对酶解效果产生很大影响，孢子浓度筛选实验结果 为：ptl65在孢子浓度为107个／ml浓度时，菌丝萌发的时间比孢子浓度为108个／ ml以上时菌丝萌发时I’日J短，酶解效果也比孢子浓度大的酶解效果好，其他菌株结果 也一致。 不同的菌株由于各自细胞壁的成分有或多或少的差别，所以酶解的最佳酶解体 系和最佳浓度也有差别。ptl65在2％蜗牛酶+2％纤维素酶的组合下酶解4h效果最 好，可以达到15．04X 也很好，酶解时间分别为3．5h、4h后产生原生质体量分别可以达到15．6X106个／ X ml，25．88 可以达到9．23×106个／ml。 菌株在不同酶解体系下，酶解获得原生质体量的最佳时间也不一致。实验发现， 纤维素酶的作用效果要缓慢一些，同样酶解条件下，如果有纤维素酶的参与，酶解 的最佳时间会稍微偏长一些，但是产生的原生质体量会最终超过其他酶解体系，所 以可以根据不同的实验目的选择不同的酶解体系，本实验是选择酶解时间较短的最 佳酶解体系和浓度。 不同的酶解温度也会对酶解效果产生很大的影响。本实验选择的几个温度梯度 酶解效果都降低；pt45和ptl73都在29*(2时酶解效果最好。 电泳条件筛选过程中，电泳总时间、脉冲时间、电压和角度，及缓冲液均对电 泳结果产生影响。不同的菌株具有长度多态性，染色体条带的分子量有差别，电泳 条件也会有很大变化，经过多次筛选所得结果为：电泳的第l阶段总时间为48h， 的胶，电压为3v／cm，脉冲时间为500s，转换角度为1060。 经过对筛选条件后得到的条带分析发现：不同菌株染色体数目和长度多态性很 2．88、2．45、0．43，其中上往下数第2条条带异常明亮，估计是的2条或者2条 以上的条带重合所致，所以其核型大小至少约为25．91Mb：pt223条带大小约为5．75、 4．49、3．50、2．99、 到从上往下第l、2、4条亮度和宽度都很大，估计有2条以上条带重合，核型大小 至少为25．76Mb。 关键词：细脚拟青霉，无性型，原生质体，脉冲电泳，核型分析 II Abstract Inthis conditionsof best and paperthe sporulation，thehydrolysisprotoplast from5strainsof andconditions field Paecilomycestenuipes of preparationtechniques pulsed fromsixdifferentof were gelelectrophoresis originsPaecilomycestenuipesinvestigated， andthemainresultswereasfollows． Aftercultivatedindifferent fortwo were media,different