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用蛋白质组擘技术筛选术稻抗白叶枯藕相关蛋白 摘要 式植物，在生产实践和科学研究中都占有极其重要的地位。水稻全基因组 测序的完成宣告了水稻功能基因组学时代的到来。蛋白质组学是在蛋白质 整体水平上研究基因的功能，是近几年来生命科学研究领域的一大热点， 是生命科学进入功能基因组时代的标志之一。 我们以Bio-Rad高通量双向电泳系统为技术平台，通过改进和优化水 稻叶蛋白的提取方法及电泳条件，建立了适合水稻叶总蛋白的高通量、高 分辨率和高重复性的双向电泳技术体系。在水稻叶蛋白双向电泳图谱上能 检测到至少1000个蛋白点。两次重复实验的双向电泳图谱的相关系数为 0．964。 由水稻黄单胞菌(Xanthomonas oryzae 病是世界水稻生产中最严重的细菌性病害，是研究植物与病原细菌互作的 模型系统。本论文利用自己建立的双向电泳技术体系分析了水稻体细胞杂 h、48h、72 交抗病新种质叶片在接种Xoo非亲和小种ZHEl73后24h的 蛋白质组变化情况，得出如下结果： 1．接种3200后48 h可能是在蛋白质水平上水稻与白叶枯病菌非亲和互 作反应的关键时间。我们发现共有77个蛋白点在接种Xoo后表达发生显著 变化。其中17个蛋白点在处理的3个时间点均发生了差异表达，8个蛋白 h和48 h和72h发生差异表达，31 点在24 h差异表达，20个蛋白点在48 个蛋白点只在48h差异表达以及1个蛋白点只在24h差异表达。77个差 异表达蛋白点中，有76个点在48h呈现表达差异。 用蛋白质组学技术筛选水稻抗白叶枯病相关蛋白 2．分离出3个之前未曾报道过的水稻抗病相关蛋白。植物硫肽激素受 体前体(PSKR)属于丝氨酸／苏氨酸激酶家族，具有富含亮氨酸重复区 (LRR)和丝氨酸／苏氨酸激酶结构域(STK)，定位于膜上，通过结合植物 硫肽激素引发胞内信号转导。磷脂酰肌醇．3激酶相关蛋白激酶(PIKK)是 一类调控细胞生长、基因表达和基因组监测及修复的信号蛋白，PIKKs蛋 白家族在真核细胞应答各种胁迫中扮演着重要的角色。生长素调节蛋白是 一类由生长素调节基因家族编码的蛋白。序列分析表明，该蛋白含有2个 重复的谷胱甘肽S．转移酶(GST)的N末端结构域。 序对64个被鉴定的差异蛋白进行亚细胞定位预测，23个蛋白点定位于具 体的细胞器上，而其中有15个蛋白定位于叶绿体上。Xoo侵染后，l，5一二 磷酸核酮糖羧化加氧酶大亚基(RcLb)的大片段表达下调，而小片段表达 上调，推测RcLb及其片段发生了降解，并使用免疫印迹技术加以验证。 本研究首次利用蛋白质组学方法分析以疣粒野生稻为抗源的体细胞杂 种在Xoo侵染后的蛋白质组变化情况，揭示了抗病新种质对Xoo的抗性是 通过一个复杂的胞内调控网络来实现的。在77个差异表达蛋白中，有64 个得到鉴定，其中51个已知功能的蛋白可以被分为5类：光合作用相关蛋 白、抗氧化防御蛋白、蛋白更新、信号转导和代谢。利用TargetP程序对 64个被鉴定的差异蛋白进行亚细胞定位预测，其中15个蛋白定位在叶绿 体，8个蛋白定位在线粒体上。因此，要全面阐述水稻抗病新种质对Xoo 的抗性机理还需进行亚细胞差异蛋白质组学的研究。同时对新的抗病相关 蛋白的进一步研究也将有利于揭示水稻抗病新种质对Xoo的抗性机理。 Il 用蛋白质组学技术筛选水稻抗白叶枯病相关蛋白 关键词：体细胞杂交水稻，白叶枯病，叶片，双向电泳 111 用蛋白质姐擘技术筛选水稻抗白叶枯病相关蛋白 ABSTRACT sativaL．)isnot themost of