幽门螺杆菌对克拉霉素耐药性及其机理与研究.pdfVIP

浙江大学博士研究生论文 幽门螺杆菌对克拉霉素耐药性及 其机理的研究 浙江大学医学院 内科学(传染病学) 博士研究生 刘有恃 导 师 厉有名教授 中文摘要 背景与目的人类幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，简称H．pylori或简写为 Hp)是一种革兰氏阴性菌。主要存在于胃粘膜的粘液层，被认为是慢性活动性 胃炎、萎缩性胃炎、十二指肠球部溃疡的重要致病因素，是胃癌的高危因素， 与粘膜相关的淋巴瘤等疾病关系密切。越来越多的研究发现H．pylo“感染和许 多胃肠外疾病，包括心血管疾病、皮肤病等有某种统计学上的关联，因此， H．pylori感染及其相关疾病己成为重要的公共健康课题。 H．pylori对抗生素，特别是对克拉霉素和甲硝唑的原发耐药率在普遍上升． 对常用根除方案的疗效产生了影响。阐明耐药机制、克服原发耐药、避免继发 耐药和治疗失败后的补救治疗是近年H．pyIori治疗方面的研究热点。 23s rRNA基因的点突变有关，导致核糖体的构象改变，使大环 产生与H．pylori 内酯类抗生素结合位点也随之发生改变，进而使H．pylori与大环内酯类药亲和 能力减弱，药物不能阻止细菌的蛋白合成，最终产生耐药性。 基因芯片其实质是在玻片、硅片、薄膜等载体上有序地、高密度地固定大量 的靶基因片段或寡核苷酸片段，这些被固定的分子探针在基质上就形成了高密 2 浙江大学博士研究生论文 度的DNA微阵列。样品核酸分予经过标记后，与固定程载体上的DNA阵列中 鹣熹遴纾杂交。避遘捡溅杂交售磅蠢获缮样瑟分子戆羧爨秘摩残绩怠，簸瑟对 熬因序列及功能_i{}行大规模、高密度的研究。由于基因芯片采用了信息的集约 纯和平行处瑾霖理，其商无可磁羧的高激、茯速和多参数静将赢，是传统生物 技术的一次重大创新和突破。基因芯片威用面很广，如鼷学、攀事、司法及农 渡等，其体包括蒸因表遮谱、疚瘸诊断、药物筛选、新蕊因寻找、重测序、基 因分型、避传作嬲和基瞰突变等多个领域。还可以进行熬因功能研究及疾病发 擞机制、疾病分烈及药物筛选等多方面研究。 本磺突选取甓镶下霪黻膜活捡标本，体乡}分褰、培养嬷门螺耱莲，势行克拉 麟素药敏试验，初步筛套人群中幽门螺杼菌对克拉霉素的耐药情况。寡核苷酸 f臻A萋因2142、2l毒3窝2ls2佼蠡突交， 徽阵列鼓求与铡黪检测瓣。pylo蠡23S 23S 分析H．pylorirRNA基因多态性与H．pylo“对克拉撼索耐药的关系，探索 }{。pylori辩克拉霉豢辩芬静分子梳镧，攒辱雅庆鞠药。 第一部分 人群中盎秘螺杆篱对克拉霉素对药涟的调查 本实验牧集嚣辘捡套滚铡，敬霹嚣貘滤检菰本进行壬{+pyl积臻莠，努瘸鉴定 臌行克拉蹲素药敏试验，初步筛查H．pylo“对克拉霉素的耐药情况，监测H．pylo“ 黼药菌撩。 1、材料 胃粘膜活检标本取自普陀入强医院、三门人隈医院、义乌市人民医院、镇海 就赛医院，嘉兴帑第一人民医院、温蛉枣第一人民医院挥霉镜梭蜜的病人，雷 赛和胃体各取l块粘膜组织。患者接受霹粘膜活检均签鞯知情同意书。 2、实验方法 胃镜下活检组织研磨后加入增菌管中，37℃徽需氧培养48小时，再用接种 环攘酝墙薄液在分离培养蒸上分离，徽器鬣培养72，l、辩，迸嚣鳃港养。掰褥菌 3 浙江大学博士研究生论文 株直接擞微镜检查后经氧化酶艇应试验法、触酶试验、尿素酶试验撩定为 辩《yl越滚拣。豢螽震缎黪骧l鬟扩教法行靛生素焚物敏感试验检测珏。搿l赫对竟 j迎霉素的耐药性。 3、缝暴 (1)H