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应用线粒体序列对几种海参的初步鉴定和系统分类的研究 应用线粒体序列对几种 海参的初步鉴定和系统分类的研究 摘要 海参在分类上属于棘皮动物门中现存的六个纲之一的海参纲。全球大约有 】200多种海参分别隶属于海参纲的六个目中。海参纲根据海参的形态特征如： 触手的形状、管足和呼吸树的有无分为6个目。而在科的水平上，其分类的主要 依据是埋没于外皮之下的微小的石灰质骨片，其中海参咽部的钙质骨板(石灰环) 的形态在海参分类上很重要。在种的水平上，其形态上的差别较小，对海参进行 种的水平上的区分没有非常精确有效的方法。对于已被加工过的干参则更缺乏科 学的鉴定方法，需要寻找一种简便准确的方法对加工后的海参进行鉴定。 由于干海参经过一系列复杂的处理过程后，其基因组DNA已被降解掉，所以 用其他基于基因组的分子标记方法无法进行鉴定。而由于动物线粒体基因组在遗 传上具有自主性，每个细胞中有1，000～1，0000个拷贝，基因组的结构比较简 单、稳定，便于进行结果分析。且个体内的线粒体DNA具有高度的均一性，一般无 组织特异性，则本实验采用线粒体序列分析的方法对海参进行鉴定。 采用聚合酶链式反应(PCR)对大连海参，青岛海参，日本关东参，日本关 西参，俄罗斯红参，白乳参，小梅花参，靴参，乌枣参，西洋海参样本的线粒体 蛋白质的编码基因(细胞色素氧化酶COI)进行了扩增，电泳检测在650bp左 右都得到了清晰的扩增产物条带。PCR产物纯化后与T载体连接，进行了克隆、 测序。分别得到了长度分布在620—660之间(不含引物)的碱基序列，10个种 类海参的COI片段的碱基组成差别都不大，GC含量分布在41．4％一45．3％之间。利 用MEGA软件检测到以大连海参1号(DLl)样品为参照数据，所有个体在 652bp长度的片段中共检测到发生替换的变异位点为163个(不包括插／k／缺失多 态位点179个)。16种单倍型间的遗传距离差距不大，梅花参与其他海参的遗传 应用线粒体序列对几种海参的初步鉴定和系统分类的研究 同个体间的遗传距离构建NJ和MP系统树。海参中COl片段的成功扩增，再次证 实该引物在棘皮类中通用性良好。本法仅仅是对海参进彳亍了初步鉴定，该方法齑 有不完善之处。由于需要确定海参在基因水平上的变异是否得到积累和保留，造 成了物种问较大的遗传差异．则礤准确鉴定海参．还要进行大数量的测序工作， 或结合其他基因和方法进行更加深入的探讨、研究。 关键词：线粒体海参鉴定 应用线粒体序列对几种海参的初步鉴定和系统分类的研究 PiIot of andgoIecular of Studyidentify EvoIution SeveraIsea cucumbersBasedon啊itochondri aI DNA Sequence ABSTRACT Thesea oneofthesixextantclassesofthe cucumbers，classHolothuroidea，constitute marine Eehinodermata．The1 200S ofseacucumbersate exclusivelyphylum approximatelypecies intosixorders．Seacucumberordersare onthebasisof partitioned distinguished gross characterssuchasthe ofthetentacles．theorabsenceof morphological morphology