用DefH9-iaaM5基因和Rol+ABC基因转化沙田柚与研究.pdf

ABC基因转化 用DefH9-iaaM5基因和Rol 沙田柚的研究摘要 Hout)是芸香科柑桔属中著名的柚 沙田柚(CitrusgrandJsvar．shatinyou 类良种，在我国栽培历史悠久，品种繁多，栽种范围广，面积大，年产量1866985 吨，远销东南亚，但由于其种子多，平均每个果实种子数约为120多粒，严重影 响了其商品价值和在国际市场上的竞争能力；此外，沙田柚树体高大，不便管理， 生产成本较高。因此，增加无核和矮化性状已成为沙田柚遗传改良的重要研究课 题。本文以沙田柚为应用研究对象，通过对离体再生条件、抗生素筛选条件以及 根癌农杆菌介导沙田柚遗传转化条件的优化，建立了高效的离体再生系统和遗传 ABc矮化基因导入沙田柚，对转化 转化体系，并将Defttg-iaa315无核基因和Rol 植株进行了分子检测，主要研究内容及结果如下： 1．研究了外植体的离体再生系统。建立了沙田柚无菌苗繁殖体系，并对外 植体不定芽再生能力以及基本培养基、6一队浓度、激素组合和活性碳等因素对 上胚轴不定芽再生能力的影响进行了比较，筛选出沙田柚上胚轴为离体再生体系 最佳外植体，其分化不定芽的适宜培养基为胚+3mg·L-‘6-队。 2．通过卡拉霉素敏感性试验，确定了沙田柚上胚轴外植体不定芽诱导的卡 对沙田柚上胚轴不定芽芽诱导和农杆菌抑菌效果的影响，发现两种脱菌剂浓度超 过500mg·L-I时对上胚轴外植体不定芽的诱导有抑制作用，而且随着浓度升高 抑制程度加大。抑菌试验表明，Cef对EHAl05和C85菌株的抑菌效果比Cb好， 适宜的脱菌浓度为500mg．L-t。 3．通对影响农杆菌转化效率几个主要因素进行的研究发现，沙田柚上胚轴 外植体在侵染前预培养2d、农杆菌侵染时浓度0D。值为0．5、侵染15min、侵染 乙酰丁香酮对转化效果无明显的影响。 oL-16-BA+75mg·L-1Kan+500mg 4．将通过共培的上胚轴在MS+3mg ·L-1Cef筛选培养后的抗性芽，利用茎尖微芽嫁接的方法，嫁接到卡里佐枳橙 珊 ABC基因植株，转化率分别为1．73％和3．19％。 基因植株和9株转肋7 关键词：沙田柚；DefH9一iaaM5基因；RolABC基因；再生系统；根癌农杆菌； 遗传转化 IV onTransformation Study ofD andRolABC Genesto Shatianyou (Citrus Hout) grandisvar．shatinyou Abstract with countrya fiomitsvarious and longplantinghistory．Benefit styles strong hasbeen annual local isaround adaptivefaculty,it widely