EGFR抑制剂及联合放化疗对头颈鳞癌体外治疗与疗效预测.pdf

·中文论著摘要· EGFR抑制剂及联合放化疗对头颈鳞癌 体外治疗和疗效预测 目 的 cell 头颈癌被认为是第七大常见肿瘤，其中鳞状细胞癌(Squamous carcinomaoftheheadand neck，HNSCC)占头颈癌的90％。手术、放疗或手术联 合放疗是头颈癌治疗的基础。近年来，随着放化疗联合治疗模式的逐步建立，晚 期病人生存率和局部控制率有了一定程度的提高。然而在头颈癌放化疗治疗中仍 然存在一些问题，如：放化疗毒副作用大、肿瘤对放化疗不敏感、治疗后病人复 发率高、5年生存率低等。迄今为止，头颈癌放化治疗和疗效预测仍是肿瘤治疗 的一个难题。 肿瘤特异性分子的靶向治疗具有特异性强、在有效杀灭肿瘤细胞的同时不损 伤正常组织的优点，它是针对可能导致细胞癌变的环节，从分子水平逆转这种恶 性生物学行为，从而抑制肿瘤细胞生长的生物治疗模式。其中表皮生长因子受体 factor growth (Epidermal receptor，EGFR)是当前分子靶向治疗研究的热点。 聚体，随后发生自身磷酸化，激活其下游主要信号通路，调节细胞功能，如细胞 增殖、凋亡、血管形成、细胞粘附等，可导致细胞癌变，进而发生浸润及转移 等。研究表明，80％．90％头颈鳞癌患者的EGFR为阳性。EGFR的过度表达与预 后差、转移快、生存期短和放化疗不敏感等密切相关。 EGFR的靶向药物主要有两类：一类为单克隆抗体，如西妥昔单抗 体，针对受体胞外配体连接区，阻止配体与受体的结合而抑制受体的激活。另一 制受体胞内酪氨酸激酶活性区。 EGFR靶向药物只起到抑制肿瘤的作用，不能杀伤肿瘤细胞，其有效率在 10％左右。因此，靶向治疗联合放化疗可能有利于提高疗效，减少副作用，是肿 瘤治疗的发展趋势。 目前，在晚期头颈鳞癌治疗中，有学者报道Cetuximab联合放疗或化疗提高 及常规放疗是否能提高疗效；以及对它们疗效的预测，国内外未见报道。本实验 利用10株头颈鳞癌细胞克隆模型，分别比较单药治疗、联合治疗对细胞生存活性 的影响，同时检测了10株HNSCC细胞的ErbB家族成员蛋白表达及信号通路关键 因子，预测EGFR抑制剂在头颈鳞癌治疗中的疗效，为进一步提高头颈鳞癌治疗 疗效，合理应用靶向治疗提供重要线索。 方法 一、研究对象 8，SCC．9，SCC．1 40来源于舌癌。 二、研究方法 1、细胞培养： bovine 细胞系传代于15．30代之间。10％热灭活胎牛血清(fetalserum， 0．02％K．EDTA消化传代，每周传代1．2次，细胞维持在对数生长状态。 2、克隆形成率分析法： Ham’s F．12(15％FBS)培养液。96孔培养板每孔细胞的接种数根据细胞植盘 率(Platingefficiency，PE)调整。加干预因素，孵育箱培养4周，倒置显微镜下观 查，每孔活细胞32个的孔作为阳性孔而计数。 3、Westernblot方法： 2 检测人HNSCC细胞ErbB家族成员蛋白表达和活性。细胞裂解液以相同蛋 白量上样，SDS．聚丙烯酰胺凝胶电泳，分别进行一抗、二抗杂交，ECL显色。 4、I汀．qPCR方法： 检测人HNSCC细胞ErbB家族成员mRNA表达。 (1)Primer software设计引物和Taqman探针。 Express (2)利用Trizol试剂提取细胞总RNA。 (3)重组质粒pEBS7一EGFR作为标准品，actin为对照。 三、实验分组 l、96孔培养板克隆形成率分析法检测HNSCC细胞对三种药物 实验设细胞对照组和药物(5种不同浓度)处理组。 或Gefitinib联合放疗