毛细管电泳泡状检测池的制备及性能考察.pdfVIP

第27卷 分析化学 (FENXIHUAXUE)仪器装置与实验技术 第4期 199!〕年4月 ChineseJoumalo#AnalyticalChemistry 铭5~489 毛细管电泳泡状检测池的制备及性能考察 张样民 ‘柳 臻 姚 健 黄 爽 (复旦大学化学系上海200433) 摘 要 采用局部成泡法自行制备毛细管电泳仪用泡状检测池。与普通圆柱形检测池相比 采用泡状池，检测信号可以提高6倍。对照讨论了泡状池对电泳过程的影响。 关键词 毛细管电泳，泡状检测池，灵敏度，柱上检测 1 引 言 高效毛细管电泳(HPCE)由于其高效、快速、进样量少等优点在生化、药物领域得到了广泛 的应用 一〔‘’〕。紫外(W)检测是目前使用最普遍的检测方法之一4-〔6)。为了减小谱带扩张，紫 外检测主要采用柱上(on-column)检测的方法，然而，由于细孔径毛细管的曲率以及体积小等方 面的原因，紫外检测的灵敏度受到了很大的限制。近年来，Z形池、矩形毛细管、轴向多反射池 等经特殊设计的毛细管电泳检测池已见报道，一〔’。〕，它们可通过增加光程来提高灵敏度，但它们 分别存在价格昂贵、实验室制备不易、操作困难、易脆易断等问题。 本文在实验室条件下自行制备毛细管电泳紫外检测用泡型检测池，制备过程简单，实验操 作方便，不需要改变任何其它电泳条件，并且此类检测池适用于任何一种紫外检测型电泳仪。 实验结果表明，采用泡状池，检测信号可以提高6倍。 2 基本原理 对于采用UV检测的毛细管电泳仪，增加毛细管内径可以提高灵敏度，但电流的增加以及 随之而来的焦耳热限制了这种方法。可以在检测池窗口处扩张内径，形成泡状，从而增加检 测的有效光程。同时，检测池处毛细管壁厚的下降又有效地减少了管壁所引起的光散射以及 失真等不利的光学因素。 3 实验部分 3.1 仪器 毛细管电泳仪:由岛津IAP20型等速电泳仪自行改装;紫外检测:254nn;高压电源(0一30 W).LM14-204型自动平衡记录仪(上海分析仪器厂);JLC730058型数字式显微镜(上海分析 仪器厂);石英毛细管柱(河北永年光导纤维厂),i.d.50画，o.d.360f-rn，有效长度40cm. 3.2 试剂 SDS(上海白猫洗涤剂厂);丹参酮(中国药品检定所);头抱氨节(苏州第一制药厂)。对、 1998-07-06收稿;1998-11-09接受。 486 分析化 学 第27卷 间、邻苯二酚、丙酮、四氢吠喃、硼砂、磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、氢氧化钠均为分析纯。 3.3 实验步骤 3.3.1泡状池的制备 截取普通石英毛细管(i.d.50pm,o.d.360pm)50cm长，封住毛细管 一端，于另一端通人高压空气。采用氢氧焰，在距毛细管一端40cm处局部(约5mm宽)加热。 石英毛细管在玻璃化温度以及管内高压空气的同时作用下缓慢扩张，同时平行转动毛细管两 端，调节被加热处的扩张使之为均匀泡形。扩张的倍数可由数字显微镜控制。当扩张达到所 需要求时，停止通人空气，再轻扯毛细管两端使泡状扩张区与整根毛细管保持在一轴线上，然 后停止加热，把制备好的泡状检测池按照安装普通毛细管的方法装于任何一种紫外检测的电 泳仪上即可。由于泡状池的宽度可控制在5mm左右，泡状池上仍保持有一定曲率，能承受一 定应力，不会因管壁厚度减小而折断。 为了考察不同扩张大小的泡状池对检测信号的影响，制备了内径的扩张分别为普通毛细 管检测池(i.d.50pm)3倍、5倍、6倍、8倍、10倍的泡状检测池。 3.3.2 电泳条件 工作电压在 10-15kV，采用恒压电泳。每次进样并检测后用0.1mol/L NaOH溶液、二次去离子水依次清洗毛细管，再充满背景电解质液。 4 结果与讨论 4.1泡状池大小与检测信号的关系 以2%的丙酮溶液为检测对象，分别把扩张倍数不同的5种泡状检测池与普通检测池(内 径50pm，壁厚155pm的圆柱形石英毛细管)作对照实验，对照数据见表1(电解质溶液为标准 硼砂缓冲溶液，pH=9.2)。可以发现，随着检测池窗口毛细管内径的扩大、壁厚的减小，相应 的吸收光程的增加和管壁对光散