海芋过氧化氢酶的分离纯化及其性质.pdfVIP

第 １３卷第４期 生　 物　 加　 工　 过　 程 Ｖｏｌ１３ Ｎｏ４ ２０１５年７月 ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｊｕｌ２０１５ － ｄｏｉ：１０３９６９／ ｊｉｓｓｎ１６７２ ３６７８２０１５０４０１０ 海芋过氧化氢酶的分离纯化及其性质 李思莹，黄卓烈，郑华章，黄丹丹 （华南农业大学 生命科学学院，广东广州 ５１０６４２） 摘　 要：为了探索海芋（Ａｌｏｃａｓｉａ ｍａｃｒｏｒｒｈｉｚａ）过氧化氢酶的分子结构和酶学性质，提取海芋新鲜叶片、叶柄和块茎的 粗酶进行活力比较和同工酶分析。 用Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２００凝胶过滤层析法将粗酶分离纯化，以ＰＡＧＥ 电泳对酶纯度鉴 定。 结果表明：海芋过氧化氢酶较单一，没有同工酶。 经层析法进行分离获得电泳纯的过氧化氢酶，其活力回收率 为４０８３％，纯化倍数为８８８倍。 十二烷基硫酸钠 聚丙烯酰氨凝胶电泳（ＳＤＳ ＰＡＧＥ）分析结果发现：该酶由５条 ５ × 肽链组成，全酶相对分子质量为２６２１ １ １０ 。 酶学性质研究结果表明：该酶最适反应温度４０ ℃，最适ｐＨ 为７５。 在２５～４５ ℃和ｐＨ ６０～９０ 下，该酶能保持较强的催化活力，稳定性较好。 在最适条件下，该酶的Ｋ 值为１６４３ ｍ ｍｍｏｌ／ Ｌ，对底物的亲和力较好。 甲醇、乙醇和异丙醇对此酶活力有显著的抑制作用。 关键词：海芋过氧化氢酶；分离纯化；酶活力；酶学性质 － － － 中图分类号：Ｑ５５　 　 　 　 文献标志码：Ａ　 　 　 　 文章编号：１６７２ ３６７８（２０１５）０４ ００５２ ０６ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ，ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆＡｌｏｃａｓｉａ ｍａｃｒｏｒｒｈｉｚａ ｃａｔａｌａｓｅ ＬＩ Ｓｉｙｉｎｇ，ＨＵＡＮＧＺｈｕｏｌｉｅ，ＺＨＥＮＧ Ｈｕａｚｈａｎｇ，ＨＵＡＮＧ Ｄａｎｄａｎ （Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｓｏｕｔｈ Ｃｈｉｎａ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｇｕａｎｇｄｏｎｇ ５１０６４２，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎ ｏｒｄｅｒ ｔｏ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅ ｃａｔａｌａｓｅ，ｃｒｕｄｅ ｅｎｚｙｍｅ ｗａｓ ｅｘｔｒａｃｔｅｄ ｆｒｏｍ ｌｅａｖｅｓ，ｐｅｔｉｏｌｅｓ，ｔｕｂｅｒ ｏｆ Ａｌｏｃａｓｉａ ｍａｃｒｏｒｒｈｉｚａ． Ｔｈｅ ｅｎｚｙｍｅ ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓａｎｄ ｉｓｏｚｙｍｅｓｗｅｒｅ ｃｏｍｐａｒｅｄ ａｎｄ ａｎａｌｙｚｅｄ ａｍｏｎｇ ｔｈｅ ｏｒｇａｎｓ． Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ２００ ｇｅｌ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｐｕｒｉｆｙ ｔｈｅ ｅｎｚｙｍｅ． Ｐｏｌｙａｃｒｙｌａｍｉｄｅ ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ （ＰＡＧＥ） ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｉｄｅｎｔｉｆｙ ｔｈｅ ｅｎｚｙｍｅ ｐｕｒｉｔｙ． Ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｎｏ ｉｓｏｚｙｍｅ ｏｆ ｃａｔａｌａｓｅ ｉｎ Ａｌｏｃａｓｉａ ｍａｃｒｏｒｒｈｉｚａ． Ｔｈｅ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｗａｓ ４０８３％ ａｎｄ ｔｈｅ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ