自外周血记忆B细胞体外活化和分化抗原特异性浆细胞的方法研究.pdfVIP

垦区鱼蕉堂苤查!!!!堡!旦筮!!鲞筮兰塑!!!』!坐塑!!塑：』!!Y!Q!i：y堂：!!：盟!：! ·305· ·基础研究· 自外周血记忆B细胞体外活化和分化抗原特异性 浆细胞的方法研究 毕冬梅韩晓建石佳宁 刘晔金艾顺 【摘要】 目的建立自人外周血淋巴细胞(PBMCs)中的记忆B细胞活化和分化特异性抗体分泌 细胞(如浆细胞)的体外活化方法，为抗体药物研发提供研究基础。方法采集两名接种过乙型肝炎疫 苗3年和25年健康成年志愿者(z和L)外周血，分离PBMCs，通过白细胞介素(IL)-2、IL-4和Toll样受 体诱导剂(CpG、R848)体外诱导活化记忆B细胞。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养上清中总 抗体和HBsAg特异性抗体的含量；通过酶联免疫斑点试验(ELISPOT)检测培养细胞中总抗体分泌细胞 DNA (ASC)数量的变化和HBsAg特异性抗体细胞数量。结果活化第6天，对照组和两个活化组[CpG rig／mL、80．87ng／mL和85．97ng／mL，两个活化组(C组和R组)均明显高于对照组(t=23．318，60．639， P均0．05)。ELISPOT检测ASC数量，结果显示，C组和R组数量均多于对照组，并且R组明显多于C 组。两种活化方法均能在体外诱导B细胞活化，但R组活化效果更佳，确立R组为最佳活化方法。用 该方法活化两名乙型肝炎疫苗接种者PBMCs，ELISA检测活化组特异性抗体浓度，R组显著高于对照组 数量，R组均明显多于对照组。结论确立诱导剂R848和细胞因子IL一2联合能够有效地诱导外周血记 忆B细胞体外活化和分化抗原特异性浆细胞，为今后抗体药物研发提供了研究基础。 【关键词】 外周血单个核细胞；记忆B淋巴细胞；体外活化；抗原特异性浆细胞 Establishmentofactivationanddifferentiationof Bcellsinto cells memory secreting antigen-specific from bloodmononuclearcellsinvitroBI peripheral Dongrnei，HANXiaojian，SHIJianing，LIUYe，JIN MedicalScience Medical Aishun．DepartmentofImmunology，BasicCollege，HarbinUn扬emity，Harbin150081， China author：JIN CorrespondingAishun，Email：aishunjin@ems．hrbmu．edu．an Toisolate devel— 【Abstract】Objective cells)for antigenspecificantibody—secretingcells(plasma of efficientmethodsfortheactivationanddifferentiationof Bcells established opmentantibodydrug，we memory into cellsinhuman blood vitro．MethodsPBMCswereisolated plasma