河豚卵巢源红酵母产类胡萝卜素研究.pdfVIP

摘要 IUl J]IIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIIII IIIIIII Y2403116 摘要 类胡萝卜素是一类广泛分布于动物、植物及微生物的重要天然色素类物质， 具有抗氧化、防衰老、皮肤保护、预防肿瘤和心血管疾病等重要生理功能，被认 为是最具潜力的双功能色素。本论文从河豚鱼卵巢中分离出一株红酵母，并对该 酵母所产色素进行了提取、分离纯化及结构鉴定。主要研究内容及结果如下： 1．对来自野生河豚鱼卵巢及肝脏的微生物进行分离，从卵巢中筛选到一株橘 红色的菌株TL．3。该菌株菌落较大、橘红色、表面光滑、湿润，革兰氏阳性， 菌体细胞呈卵圆形；酵母鉴别染色观察到其含有子囊孢子；PCR扩增该菌株IST 序列，经序列同源性比对分析，该菌株与红酵母属(Rhodotorulasp．)相似度达99 ％。根据菌株的菌落形态特征观察和生理生化试验，以及26SrDNA序列分析， 鉴定该菌株为红酵母。 2．对该菌株产类胡萝t-素的培养基及培养条件进行了初步研究，发现其生长 所需营养要求低，培养基组成对菌体生长及类胡萝卜素合成的影响较小；光照、 温度、pH等培养条件是类胡萝卜素合成的主要影响因素。类胡萝卜素提取的最 佳培养条件为：蔗糖2％，蛋白胨0．6％，酵母膏O．3％，NaCI7．2，20℃， 1％，pH 160 h，在此条件下，菌体生物量为12．2g／L，类胡萝卜素总 rpm，避光，培养84 产量为2．62mg／L。 3．对该菌株所产色素进行了提取、分离及结构鉴定研究。比较了四种常用的 酵母细胞破碎方法，确定酸热破壁法提取该菌体色素的效率较高，采用硅胶柱色 谱分离菌体色素的分离效果较好。应用类胡萝卜素特征化学实验、薄层色谱法、 紫外可见分光光度法、红外扫描及HPLC和核磁共振法进行色素的性质及结构鉴 定。结果表明，该酵母色素主要含有四种类胡萝卜素组分，其中两种分别为p- 胡萝卜素和番茄红素。 4．研究了酸热法提取酵母色素的条件及色素的稳定性。研究发现酸浓度、酸 浸泡时间、热处理时间及提取溶剂是影响色素提取效果的主要因素，类胡萝卜素 min，以石油醚／丙酮(2：3) 的最佳提取条件为：3M盐酸浸泡1h，热处理6 为溶剂，35℃提取30min。该酵母色素对光、温度和氧敏感，保存在极性较低 的石油醚中稳定性较好。 关键词：类胡萝卜素，河豚卵巢，红酵母TL．3，分离纯化，结构鉴定 Abstract ABSTRACT Carotenoidsare natural thatare in importantpigments widespread animals，pl antsand haveabroad functionssuchas microorganism．Carotenoids anti．． rang rates ofcancerand hear oxidation，anti-ageing，skinprotection，reduce coronary t have