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2015-10-10 发布于重庆
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月季SSRPCR反应体系的建立和优化.pdf

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华北农学报 ·2 0 0 9 , 2 4 ( 3 ) : 184 18 8 月季 SSRPCR 反应体系的建立和优化白锦荣 ,潘会堂 ,张启翔 (北京林业大学园林学院 , 国家花卉工程技术研究中心 ,北京　100083) 　　摘要 :采用L16 (54 ) 正交设计和二因素完全随机试验 ,分析了月季 SSRPCR 反应体系的主要成分 Taq DNA 聚合酶、 2 + 样本浓度、Mg 浓度、dNTP 浓度以及引物浓度对扩增结果的影响 ,建立了适合月季的 SSR 反应体系。研究结果表明: 2 + 在 20 μ Taq DNA 聚合酶宜加入 1. 5 U ,样本最适宜浓度为 30～40 ng ,Mg 的最适浓度为 1～15 mmol/ L , L 反应体系中 , μ dNTP 最适浓度为 02 mmol/ L ,单引物的最适浓度均为 1 mol/ L 。用建成的反应体系对 19 对引物筛选 ,对 12 个月季品种扩增 ,3 %的琼脂糖凝胶电泳检测 ,品种间DNA 谱带多态性丰富 ,证明该体系稳定可靠。关键词 :月季 ;SSR ;正交试验 ;反应体系 ( ) 中图分类号 :S685. 12 　　文献标识码 :A 　　文章编号 :1000 - 7091 2009 03 - 0184 - 05 Optimization and Establishment of SSR Analysis System in Roses( Rosa spp. ) BAI Jinrong ,PAN Huitang ,ZHAN G Qixiang (College of Landscape Architecture ,Beij ing Forestry University ,National Engineering Research Center for Floriculture ,Beij ing 　100083 ,China) 2 + Abstract :Using orthogonal design ,five factors including concentration of template 、Mg 、dNTP ,primers and Taq DNA polymerase were optimized to establish SSR analysis system in roses. The results showed that 30 - 40 ng DNA tem 2 + μ μ plate ,1 - 1. 5 mmol/ L Mg ,0 . 2 mmol/ L dNTP ,1 mol/ L each primer and 1. 5 U Taq DNA polymerase in 20 L reac tion system were the optimal option . Through th