稻瘟病菌SSR 反应体系的优化.pdfVIP

ChineseAgriculturalScienceBulletinVol.23No.62007June · · 农业生物技术科学 174 稻瘟病菌SSR反应体系的优化 1,3 3 2 2 3 1,3 1 臧 威 张兰兰 张国民 李柱刚 张淑园 孙剑秋 严善春 , , , , , , 1 2 东北林业大学林学院，哈尔滨 150040；黑龙江省农业科学院，哈尔滨 150086； 3齐齐哈尔大学生命科学与工程学院，齐齐哈尔 161006 摘 要 稻瘟病菌SSR检测是分子标记辅助育种的一项重要技术 为优化SSR反应体系 以稻瘟病菌 : 。 , 菌株 为供试材料 采用单因素筛选法及 4正交试验设计 研究了稻瘟病菌 分析中 504 , L 3 , SSR PCR 9 反应体系的主要成分对扩增结果的影响 结果表明 在总体积为 的 反应中 聚合 20μl PCR TaqDNA 。 : , 酶 的最适用量为 2+ 和 引物 的最适终浓度分别为 和 1.0UMg dNTP 1.0mmol/L100μmol/L ; 、 、 0.4μmol/L 利用该体系进行扩增 所得谱带清晰 稳定 非特异性带少 。 , 、 、 。 关键词 稻瘟病菌 SSR体系优化 : ; ; 中图分类号 S432.1 文献标识码 A : : OptimizationofSSRReactionSystemofPyriculariagrisea 1,3 3 2 2 3 1,3 1 ZangWei,ZhangLanlan,ZhangGuomin,LiZhugang,ZhangShuyuan,SunJianqiu,YanShanchun 1 CollegeofForestry,NortheastForestryUniversity,Harbin150040; 2 CollegeofAgriculturalScienceinHeilongjiang,Harbin150086; 3 CollegeofLifeScienceandEngineering,QiqiharUniversity,Qiqihar161006 Abstract:SSRdetectionisanimportanttechniqueofmolecularmarkerforassistedbreedinginPyricularia grisea.InordertooptimizeSSR-PCRreactionsystem,themainfactorsaffectingamplicationresultswere studiedwithsinglefactorselectionandL 4 9 3 orthogonaldesign.Theresultsshowedthattheoptimal 2+ ： reactionsystemwasasfollows the20μlreactionsystemcontainedTaqDNApolymerase1.0U,Mg 1.0 mmol/L,dNTP100μmol/LandPrimer0.4μmol/L.Usingthissystem,amplicationbandswereclear, standardandnon-especialbandswereshorter. Keywords:Pyriculariagrisea,SSR,Systemoptimization 简单序列重复 SimpleSequenceRepeat，SSR 又 ②多态性高，等位位点多，信息含量丰富； 称微卫星 Microsatellite ，是由1~5个核苷酸为单位 ③通常为共显性遗传； 多次串联组成的DNA序列，其长度大约在300bp以 ④实验操作简单，对DNA的数量和质量要求不 内。SSR是基于PCR基础上的一种分子标记，最早在 高； 人类基因组中发现，而后发现其广泛存在于真核生物 ⑤重复性、稳定性较好。 基因组中。SSR序列的侧翼具有高度保守的DNA序 因此，近年来已经成为植物遗传图谱构建、基因 列，由于重复次数差异较大，扩增出的序列长度变化 定位、物种进化与分类、品种遗传多样性、品种保护、 也较大，因而成为检测多态性的一种有效方法，可以 亲子分析与纯度鉴定、杂种优势机理及预测、分子标 [1] [2~4] 在DNA水平上检测物种的遗传多样性 。 记辅助育种等研究领域中重要的分子标记 。目前， [5] [6] [7] [8] SSR具有以下主要特点： 在大麦 、水稻 、玉米 、拟南芥 等植物中有较多应 ①数量丰富，覆盖整个基因组； 用。但是在病原菌中尤其在稻瘟病菌中，SSR引物的 第一作者简介 臧威，女，1975年出生，讲师，在读博士，主要从事植物病理学方面的科研与教