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产甘油假丝酵母甘油合成关键酶编码基因的克隆
HEREDITAS (Beijing) 2008 4 , 30(4): 508―514
ISSN 0253-9772 研究报告
DOI: 10.3724/SP.J.1005.2008.00508
1,2 2 1,2 1,2 1 1 1,2
陈献忠 , 方慧英 , 沈微 , 饶志明 , 诸葛斌 , 王正祥 , 诸葛健
1. , 214122;
2. , 214122
摘要: 产甘油假丝酵母(Candida glycerinogenes)作为优良的甘油生产菌株已经成功应用于工业化生产。但相对
于酿酒酵母, 该菌株的耐高渗机理和甘油代谢的分子机制还不甚清楚。本文根据已公布的3-磷酸甘油脱氢酶基
因的序列信息, 设计出一组寡核苷酸, 再运用简并PCR 结合反向PCR 技术从C. glycerinogenes 的基因组DNA
中获得了4 900 bp 的核苷酸序列, 递交GenBank (No. EU186536) 。该序列包含完整的编码胞浆3-磷酸甘油脱氢
酶编码基因(CgGPD)开放阅读框及其上、下游调控序列。1 167 bp 的开放阅读框编码388 个氨基酸残基的蛋白。
所演绎出氨基酸序列分析比对结果表明该基因产物的序列具有典型的胞浆 3-磷酸甘油脱氢酶结构特征, 但与
已鉴定的相关基因存在中等程度的同源性并在相应的辅酶催化位点和底物结合位点区域具有高度的保守性,
在氨基酸水平上与安格斯毕赤酵母的相似性最高, 达到70.9% 。该基因在Saccharomyces cerevisiae W303A 中异
源表达能够显著提高细胞的甘油合成能力。
关键词: 产甘油假丝酵母; 3-磷酸甘油脱氢酶; 基因克隆; 甘油合成
Cloning of the gene encoding a key enzyme involved in production of
glycerol in Candida glycerinogenes
1 2 2
CHEN Xian-Zhong , FANG Hui-Ying , SHEN Wei, RAO Zhi-Ming, ZHUGE Bin ,
2 1
WANG Zheng-Xiang , ZHUGE Jian
1. Key Lab of Industrial Biotechnology, Education Ministry, Jiangnan University , Wuxi 214122, China;
2. Research Center of Industrial Microorganisms, School of Biotechnology, Jiangnan University , Wuxi 214122, China
Abstract: Candida glycerinogenes WL2002-5, an excellent glycerol producer, has been used for industrial scale fermenta-
tion of glycerol by an aerobic process. However, our knowledge about glycerol biosy
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