用突起切断法分析MPP +对于多巴胺能神经细胞的损伤.pdfVIP

生物物理学报 第十四卷 第二期 一九九八年六月 ACTA BIOP HYSICA SINICA Vol . 14 No. 2 Jun. 1998 用突起切断法分析 MP P + 对于多巴胺能神经细胞的损伤* 蔡 东 1 ,2 王晓民 1 瞿安连2 韩松平3 于英心 1 周 专2 康华光2 韩济生 1 * * ( 1 北京医科大学神经科学研究中心 北京 100083) (2 华中理工大学生物物理与生物化学研究所 武汉 430074) ( 3 Dep t . of Pharmacol . and Phy siol . Sci ., St . Louis. University School of Med., St . Louis , MO 63104 , USA) 摘 要 对神经细胞在电压钳制方式下进行膜片钳记录受到胞体和突起空间钳位不一致的限制。本文 尝试用突起切断方法区分胞体与突起的电压门控型钙电流, 并据此对 M PP + 引起的钙电流变化进 行分析。实验结果表明 , 突起上的电压门控钙通道的最大激活电压约为+ 30mV , 而胞体的则为 - 10～10mV 左右 ; M PP + 损伤多巴胺能神经细胞后可导致电压门控型钙电流的抑制 , 这一抑制的 I - V 特性与突起钙电流 I - V 非常相近。由此提示 , M PP + 对于多巴胺能神经细胞的损伤更集中 于其突起纤维。 关键词 : M PP + 神经元 空间钳位 钙电流 膜片钳 以全细胞膜片钳技术研究完整神经细胞的膜通道时通常存在对突起部位的空间钳位问 题。这阻碍着分别研究神经元突起与胞体的电生理特性。如果某种药物对于神经细胞的作用 存在部位差异 , 按常规进行的全细胞膜片钳记录就有困难。本文尝试用突起切断方法解决这 一矛盾。 1 - 甲基- 4 - 苯基吡啶 ( 1 - met h l - 4 - hen l ridium , M PP + ) 是外源性毒素 N - 甲 y p y py 基 - 4 - 苯基 - 1 ,2 ,3 ,6 - 四氢吡啶 ( 1 - met h l - 4 - hen l - 1 ,2 ,3 ,6 - tet rah dro ridine , y p y y py M P TP) 在神经组织中被氧化产生的毒性基团。它被中脑多巴胺能神经元特异性摄取,从胞内 损伤细胞 ,最终导致人和动物产生帕金森氏病 ( Parkinson’ s Disease , PD ) 样症状[1 ] 。其毒性 机理中对于 M PP + 最先损伤突起还是胞体尚有争议[2 ,3 ] ,并缺乏相应的电生理证据。本文亦对 此进行初步分析。 1 材料与方法 1. 1 细胞培养 细胞采用多巴胺能神经细胞系 MN 9D [4 ] , 其培养基为 DM EM ( sigma) , 附加 10 % FBS , ( ) ( 2 ) 80U / ml 青霉素和链霉素 , H 7. 3 。传代前将涂以 ol - D - l sine 的盖玻片 0. 5 ×0. 5cm