TLR2激动剂肽聚糖在结直肠癌放疗中的免疫调节和损伤修复作用及其机制的研究.pdf

TLR2 激动剂肽聚糖在结直肠癌放疗中的免疫调节和损伤修复作用及机制研究 中文摘要 中文摘要 结直肠癌（colorectal cancer ，CRC ）是人类最常见的癌症之一，随着我国生活 水平的提高，饮食结构的改变，结直肠癌的发病率迅速增长，经济发达地区发病 率已接近西方发达国家（居恶性肿瘤第二位）。目前结直肠癌死亡率列我国恶性肿 瘤第5 位，且逐年递增 。结直肠癌的发生呈现出从正常组织，经过息肉、腺瘤、 高级别瘤变等病变缓慢发展至癌的漫长过程。在结直肠癌治疗过程中，如何降低 肿瘤的免疫逃逸能力，一直是人们关注的热点。 放疗是肿瘤治疗的主要手段之一，但临床上结直肠癌的治疗手段以手术和化 疗为主，只是在术前、术后通常给予患者辅助性放疗以及局部晚期与肿瘤复发的 姑息性放疗。这是因为在目前的放疗条件下，腹、盆部受到中等剂量照射后，小 肠即可出现黏膜上皮广泛性变性、坏死和脱落，引发对已消化的营养物质和水的 吸收障碍，导致腹泻以及出现频繁呕吐、水电解质代谢紊乱等急性放射病症状， 限制了放疗对结直肠癌临床治疗的效果和应用。因此，利用放疗有效地治疗结直 肠癌和肠道对辐射的敏感是一对矛盾。那么寻找一种既能协同和增加放射治疗的 效果，又能减轻辐射损伤促进其修复的药物和制剂是亟待解决的科学问题。本论 文利用小鼠结直肠癌细胞株在 BABL/c 小鼠皮下建立肿瘤模型，研究Toll 样受体 2(TLR2)激动剂肽聚糖（Peptidoglycan，PGN ）在肿瘤放疗过程中的免疫调节作 用和对肠道辐射损伤的修复作用及其机制。 一、肽聚糖在结直肠癌放疗中的免疫调节和损伤修复作用 【目的】建立肿瘤放疗模型，研究 PGN 在肿瘤放疗过程中的免疫调节作用 和对肠道的损伤修复作用。 【方法】首先建立正常BABL/c 小鼠腹部皮下荷瘤模型，将模型鼠分为4 组， 分别是不处理组（untreated ）、单给药组（PGN ）、单照射组（15Gy）、照射加给药 组（15Gy+PGN），每组30 只。接种肿瘤细胞7d 后利用医用直线加速器，对荷瘤 小鼠进行腹部照射 15Gy 电子束（9MeV ，剂量率为 2Gy/min ）。照后 1d 给予 I 中文摘要 TLR2 激动剂肽聚糖在结直肠癌放疗中的免疫调节和损伤修复作用及机制研究 15Gy+PGN 组和PGN 组小鼠腹腔注射PGN ，给药量为1.5mg/kg。观察每组中10 只小鼠的生存率以及肿瘤体积大小。每组另有20 只小鼠分别在照后1.25d、3.5d、 9d 取肠道和肿瘤，检测各组所取组织的病理学改变，小肠绒毛长度和隐窝个数， + 以及Ki67 细胞个数。 【结果】(1)15Gy+PGN 组的体重减轻率、小肠病理形态、绒毛长度、隐窝个 数和小肠隐窝增殖能力等指标和 15Gy 组相比具有统计学差异，小肠损伤程度较 轻。(2)15Gy+PGN 的肿瘤体积增大受到抑制且照后未复发，15Gy 组小鼠肿瘤在照 后12d 复发，两组相比前者肿瘤的增殖能力受到抑制。 【结论】(1)本论文首次发现 PGN 在放疗后给药能够促进小肠辐射损伤的修 复，促进肠道功能的恢复，提高放疗小鼠的生存质量。（2 ）PGN 能够协同放射治 疗肿瘤，抑制肿瘤的生长和治疗后的复发。 二、肽聚糖在结直肠癌放疗中的免疫调节和损伤修复作用机制 【目的】从肿瘤免疫应答和细胞凋亡和增殖信号通路两方面，探索肽聚糖在 结直肠癌放疗中的免疫调节和损伤修复作用机制。 【方法】在照后3.5d 取各组肿瘤模型小鼠的肿瘤和小肠，利用液氮研磨法， 抽提RNA 和提取蛋白质，先从mRNA 水平利用实时荧光定量PCR 技术检测细胞 存活相关PI3K/Akt 通路中的各种基因相对表达量，利用免疫印迹技术检测相关蛋 白的表达情况，得出受PGN 调节的基因。利用免疫荧光技术检测各组肿瘤基质中 + CD8 T 细胞、巨噬细胞、B 细胞、NK 细胞、肥大细胞的浸润情况。研磨肿瘤组织 提取蛋白，利用酶联免疫吸附技术（ELISA ）检测IL-21 、IL-1α、TNF-α 三种细胞 因子的表达量。 【结果】(1)15Gy+PGN 组小肠绒毛上皮和内皮细胞中Akt3 表达水平上升，比 15Gy 组多；但