向日葵染色体C-分带及其荧光原位杂交与研究.pdf

摘 要 本研究以内葵杂3 号三交种为材料，在已有的核型分析基础上，利用Giemsa C- 分带技术建立了染色体C-带带型；采用同源序列法克隆了 5SrDNA、18SrDNA 基因 片段并进行了序列测定；利用荧光原位杂交（FISH ）技术，将 5SrDNA、18SrDNA 和45SrDNA 定位在染色体上。本研究为向日葵染色体识别及种间亲缘关系和染色体 进化行为的研究提供了新的特异性分子标记。主要研究内容及结果如下： 1. 利用HKG(HCl-KOH-Giemsa) C-分带法对内葵杂3 号三交种染色体进行了C- 带分析，结果表明：染色体组共有62 条带纹，以中间带和着丝点带为主；带纹强弱 差异明显，其中46 条为强带，16 条为弱带；每条染色体都表现出明显 的带纹特征，带型公式为： + + + + + 2n=2x=34=8I +3T +5I+I T +4C+2CI+4CI +3CI +I T +CT +2CT 。C-带揭示了染色体 + + + + + 上的异染色质区域。 2. 以内葵杂3 号三交种基因组DNA 为模板，通过PCR 的方法扩增了 18SrDNA 和 5SrDNA 部分片段，将扩增片段克隆到 pGEM-T-easy 上，测得片段长度分别为 1808bp 和515bp 。经BLAST 分析，1808bp 序列与GeneBank 中公布的向日葵18SrRNA 基因序列同源性达99% （登录号AF107577 ）；515bp 序列与公布的向日葵5SrRNA 基 因序列同源性达 94% （登录号DQ865267 ）。除此之外，2 个序列分别与多种植物的 18SrRNA 和5SrRNA 基因的部分序列有很高的相似性，相似性分别达98 －99%和91 －99%，进一步证明了18S 和5S 核糖体基因在物种间高度保守。2 个序列已提交NCBI 并注册，登录号分别为HM638219 ，HM638217 。 3. 以45SrDNA、18SrDNA 和5SrDNA 为探针，分别与内葵杂3 号三交种染色体 进行荧光原位杂交分析，结果表明：45SrDNA 和18SrDNA 均得到3 对杂交信号且位 点分布相同，分别位于第3 对和第 10 对染色体及第2 对随体染色体的短臂末端，其 中18SrDNA 在第3 对和第10 对染色体上的信号较强，在第2 对染色体上的信号较弱； 45SrDNA 的3 对杂交信号强弱基本一致；5SrDNA 的信号位点共有2 对，分布在第7 对和第10 对染色体短臂端部，其中第7 对染色体上的杂交信号较强，第10 对染色体 上杂交信号较弱。 关键词： 向日葵；染色体；C-分带；荧光原位杂交；5SrDNA；45SrDNA ；18SrDNA Chromosome C-bands and fluorescence in situ hybridization in sunflower Abstract In this paper, the triple hybrid of “Inner Mongolia Hibrid oil sunflower 3” was used to establish C-bands karyotype with C-bands technique based on the previous karyotype analyse. 5SrDNA and 18S rDNA fragments were also cloned from sunflower and their sequences was analysed. The 5SrDNA, 18SrDNA and 45SrDNA were located on chromosomes with the fluorescence in situ hybridiz