眼针对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用及凋亡机制和研究.pdf

中文摘要 目的及背景：缺血性脑血管疾病治疗的关键在于挽救缺血半暗区濒临死亡的神经元和促 进损伤后神经功能的恢复。脑缺血再灌注损伤是指脑组织经一定时间的缺血后恢复血流供应， 使缺血性损伤进一步加重的病理现象。脑缺血损伤的机制十分复杂。脑缺血再灌注损伤缺血 半暗区神经元死亡的主要形式是细胞凋亡。眼针疗法治疗中风疗效肯定。积累了丰富的临床 经验，但作用机制研究尚不深入，本课题从抑制细胞凋亡及调控细胞凋亡死亡受体通路信号 传导探讨眼针对缺血再灌注损伤的保护作用机制，揭示眼针治疗缺血性中风部分作用机制， 更好为临床治疗中风病提供科学依据。 方法：分组方法：将健康雄性SD大鼠240只随机分为假手术组66只，模型组和眼针组各 87只。每组又分成脑缺血再灌3h，24h，72h等时间点。 模型制作方法：参照Longa改良的线栓方法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。 试验方法：眼针组取穴：上焦区、下焦区、肝区、肾区。刺法：用35x25mm毫针在相应 眼穴区距眶内缘2mm处，平刺，由该区始点向该区终点方向，刺入0．3cm，行捻转手法，留 针30分钟，留针15分钟时行针一次，持续时间1分钟。针刺时机：再灌注即刻对动物神经 功能缺损评分，随机分到模型组与眼针组，眼针组各时间点在缺血再灌注即刻及处死动物前 针刺，动物存活期间每12小时针刺一次。假手术组及模型组不做任何处理，常规喂养。 检测方法及指标：参照Longa5分制评分标准评价神经功能缺损症状评分；采用TTC染 色测：量梗死体积：光镜及电镜观察缺血半暗带脑组织病理改变及超微结构；应用TUNEL法观 察缺血半暗区脑组织神经元凋亡；采用免疫组化法检测缺血半暗区脑组织Fax，Faxl表达； isa mRNA蛋白表达；采用E1 采用RT—PCR法检测缺血半暗区脑组织caspase-3，caspase-8 方法检测缺血半暗区脑组织及血清肿瘤坏死因子一1：1(TNF-Q)含量。 数据统计方法：所有实验数据以均值土标准差(X土S)表示。所得数据用SPSS10．0软件 进行分析，组间比较采用单因素方差分析。 结果 1．眼针对神经功能缺损症状评分的影响 假手术组大鼠手术完成后，无神经缺损体征出现。眼针组、模型组再灌注3h出现明显神 经功能缺损。3h时间点，眼针组与模型组两组间比较无显著差异； 24h、72h时间点眼针组 与模型组两组问比较有极显著差异。 2、眼针对脑梗死体积的影响 再灌注24h，假手术组未发现有梗死病灶，模型组和眼针组梗死病灶主要位于右侧额、 颞、项叶皮质及尾状核、壳核区域。眼针组梗死体积显著小于模型组。 3、眼针对缺血半暗带区神经元病理改变及超微结构的影响 眼针治疗组与模型组比较，脑组织形态有明显改善。肿胀神经元少见，细胞边界清晰， 核仁明显。 电镜观察：眼针组半暗区神经元细胞可见较多线粒体、粗面内质网、核糖体；与模型组 比较明显改善，与假手术组比较有轻微改变。神经胶质细胞较假手术组比较可见少量高尔基 体、粗面内质网、线粒体、核糖体，胶质细胞基本正常。毛细血管内皮光滑，基本正常。 4、眼针对缺血半暗区神经元细胞凋亡的影响 模型组及眼针组凋亡细胞子脑缺血再灌注后3h开始增多，模型组、眼针组各时问点凋 亡细胞与假手术组相比均有显著性差异：眼针组与模型组比较，3h时问点，无显著性差异， 6 24h、72h时间点凋亡细胞数明显减少，有显著性差异。 5、眼针对缺血半暗区神经元FaxFaxl表达的影响 免疫组化染色显示：模型组、眼针组阳性目标表达均于脑缺血再灌注后3h丌始增加，各 时l’HJ点模型组、眼针组与假手术组比较阳性细胞表达均有显著性差异；眼针组与模型组比较， 3h时间点阳性目标表达无显著性差异；24h、72h时间点阳性目标表达显著减少，有显著性差 异。 mRNA表达的影响 6、眼针对缺血半暗带区Caspase一3，Caspase一8