CD200在羊膜间充质干细胞表面表达及对小胶质细胞活化调节的作用.pdfVIP

CD200在羊膜间充质干细胞表面的表达及对小胶质细胞活化的调节作用 中文摘 CD200在羊膜间充质干细胞表面的表达及对小胶质细胞 活化的调节作用 中文摘 研究背景 随着干细胞移植技术的逐渐成熟，细胞治疗在神经系统疾病中的应用引起广泛关 注。间充质干细胞(mesenchymalstemcells，MSCs)是现如今应用较多的一类具有多向 分化能力的成体干细胞，近年研究显示：从人羊膜中提取而来的羊膜间充质干细胞 （Amnioticmesenchymalstemcells，AMSCs），由于其相对于胚胎干细胞和骨髓间充 质干细胞，具有来源广泛、取材方便、易扩增、多向分化潜能以及免疫原性低等优点， 同时又避开了胚胎干细胞来源缺乏、伦理道德和法律限制等问题，是目前细胞治疗的 一种理想的种子细胞来源。越来越多的动物实验表明，移植羊膜间充质干细胞可以改 善神经功能缺损症状，但具体作用机制尚需进一步探讨。 小胶质细胞（microgliaMI）是目前公认的对脑部损伤、炎性以及中枢神经系统 退行性疾病进行反应的效应细胞，其主 特征是容易被任何形式的脑损伤或疾病所激 活，在多种神经系统病变中发挥着损伤和修复的双重作用。活化的小胶质细胞在中枢 神经系统的固有免疫反应中发挥着包括吞噬、免疫炎症反应、细胞毒性和通过抗原提 呈T淋巴细胞的调节等作用。MI被激活后释放的多种细胞因子可引起不同程度的炎 症反应和细胞凋亡，构成了 病理级联 效应。由此我们推测，在“ ” CNS早期的炎症或 损伤过程中如果能调控MI 的活化程度将对控制整个病理或损伤过程非常有利。 CD200属于白细胞分化抗原是一种细胞表面的跨膜糖蛋白其表达范围较广，主 要在神经细胞、胸腺细胞、B细胞 T细胞、血管内皮细胞等。有研究表明CD200可 以表达在羊膜间充质干细胞表面。CD200R与其配体CD200均属于免疫球蛋白超家 族，CD200R主要表达在包括小胶质细胞在内的单核巨噬细胞系统和少量的T细胞上。 CD200 CD200R ,CD200 与 通过细胞间接触诱导免疫耐受传递抑制性信号。研究发现 能够下调中枢神经系统小胶质细胞的活化状态使小胶质细胞诱导产生的细胞因子减 I 中文摘 CD200在羊膜间充质干细胞表面的表达及对小胶质细胞活化的调节作用 少。由此我们设想羊膜间充质干细胞也有可能通过这种途径来调节中枢神经系统MI 的活化，进而控制由其触发的一系列炎症级联反应的发生，从而发挥细胞治疗作用。 目的 本实验研究CD200-CD200R相关的细胞间接触途径探索CD200在羊膜间充质 干细胞对小胶质细胞免疫调节中的作用，以期更全面了解羊膜间充质干细胞的作用机 制。 第一部分 羊膜间充质干细胞及小胶质细胞的体外培养及鉴定 方法 1.AMSCs 的体外培养及鉴定，分别观察其原代培养和传代培养细胞生长情况并 作出生长曲线；AMSCs 的体外诱导分化实验 2.MI 的体外培养、纯化及鉴定 3.MI 的活化 结果 1.成功由羊膜组织分离、培养得到的AMSCs具有MSCs 的形态和细胞表面标志， 符合MSCs 的生长、增殖特点，流式细胞仪检测显示该细胞表达CD73、CDl05，不 CD45 HLA-DR AMSCs NSE GFAP 表达 和 。 诱导前不表达 ，弱表达 ，经诱导后细胞 强表达神经细胞特异性标记物NSE、GFAP。 2. MI 成功分离、纯化的 形态上细胞体呈细长或椭圆从胞体发出细小而有分支的 突起。CD68免疫荧光染色阳性的细胞达到细胞总数的95%以上，MI纯度较高。 3.MI LPS MAC-1