EGF对延迟整流性钾离子通道功能调节及研究.pdfVIP

英文缩写 17 中文摘要 EGF对延迟整流性钾离子通道功能调节的研究 摘 要 延迟整流性钾离子通道在心肌动作电位的复极化过程中发挥重要的 作用，它包含两种不同成分：快激活延迟整流钾通道电流(Il(r)和缓慢 有离子选择性的P环，4个相同0【亚基的P环组成一个离子滤过性孔道， 孔区的结构高度保守，决定了通道对钾离子的高度选择性，第4个跨膜区 (s4)上含有4个带正电荷的氨基酸残基，为电压敏感区，能够感受膜 电位的变化，调节孔道开放与关闭。N-末端和C．末端都位于胞内。KCNEl 编码的蛋白为单跨膜多肽链，作为辅助亚基调节KCNQl通道的生物物理 延迟整流性钾离子通道功能异常或数目上调、下调均可导致心律失常的发 生，因此，该通道对于维持正常的动作电位以及产生病理性的心律失常都 具有重要意义，是多种调节途径作用的重要靶点。 表皮生长因子受体(EGFR)是I型跨膜酪氨酸激酶受体，定位于细 胞膜，编码分子量170KDa的跨膜糖蛋白，由三个部分组成：即胞外配体 结合区；疏水性的跨膜区；具有酪氨酸蛋白激酶活性的胞内区。与配体 EGF结合后EGFR构象发生变化，引起受体在膜上迁移、聚合、形成寡 聚体，同时被激活，磷酸化自身的酪氨酸残基，使EGFR激酶活性进一 步提高，并对其它底物蛋白进行磷酸化。EGFR受体的酪氨酸激酶发挥两 方面作用：一方面磷酸化自身酪氨酸残基，为募集其它信号分子提供平台； 另一方面将募集的靶蛋白的酪氨酸残基磷酸化，引起下游信号转导。 EGFR在调控细胞的生长、分化、增殖、迁移、凋亡等生理功能中发挥重 要作用。 离子通道受细胞内许多信号途径包括蛋白磷酸化和去磷酸化的调节， A23、tyrphostin n-丁抑制豚 广谱酪氨酸激酶抑制剂tyrphostin A25和genistein 中文摘要 激酶抑制剂引起的IK。电流的降低，因此认为：基础IK。依赖于IK；通道或通 道调节蛋白的酪氨酸磷酸化水平。 本研究以非洲爪蟾卵母细胞作为表达系统，观察EGFR激活后对 讨其作用机制，并在豚鼠乳头肌组织上观察了EGF对动作电位的影响， 以证实EGFR对IK。和IK，的调节作用是否具有生理学意义。 一、KCNQl及KCNQI／KCNEl钾离子通道电流特征 通道，观察KCNQl和KCNQl／KCNEl钾离子通道的电流特性。 I限制性核酸内切酶消化 pGEMHE质粒载体中，提取质粒DNA，经Nhe KCNEl 爪蟾冰冻麻醉状态下，于下腹部切开--4口，取出卵母细胞，放入含2 g-Lq 82．5，KCI 1，HEPES 胶原酶的OR2溶液(mmol·L～：NaCl 5，pH 2，MgCl2 7．4)中翻摇消化1．5～2hr，制成单个卵母细胞，挑选V，Ⅵ级卵母细胞放入 ND96培养液中(mmol·L～：NaCl96，KCI 5， l，CaCl21．8，MgCl2l，HEPES 7．4)。(3)将5 KCNEl混合后注射入卵母细胞中， pH ngKCNQl、lng 中，置于18V培养箱中，于注射后2--6d，采用双电极电压钳技术观察 KCNQl和KCNQl／KCNEI钾离子通道的电流特性。 I限