大白菜BrTCP基因的克隆及其生物信息学分析.pdf

青岛农业大学硕士论文 目录 目 录 摘要………………………………………………．：………．．i Abstract．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．iii 前言……………………………………………．‘……………1日U舌…………………………………………………………．1 1研究目的及意义…．‘．：…………………………………………．．1 2国内外研究进展………………………………………………．．2 2．1叶球发育机理………………………………………………．．2 2．2TCP基因家族研究进展……………………………．……………2 2．2．1TCP domain的结构特征………………………………………．3 2．2．2TCPdomain基因的分类………………………………………．3 2．2．3TCP domain的生化功能………………………………………．4 2．2．4TCP domain基因的功能与对细胞周期的调控有关……………………4 2．3生物信息学研究………………………………………………5 2．3．1生物信息数据库……………………………………………．5 2．3．2生物信息学分析方法…………………………………………6 2．4转录因子与基因调控…………………………………………．．7 2．4．1转录因子的概念……………………………………………．7 2．4．2转录因子的结构……………………………………………．7 2．4．3转录因子的调控……………………………………………．8 2．5转基因植株鉴定方法研究进展……………………………………9 2．5．1外源基因整合水平的鉴定……………………………………．．9 2．5．2外源基因转录水平的检测……………………………………．12 2．5．3转基因植株外源基因表达水平检测……………………………．．12 2．5．4转基因植株抗逆性评价…………一…………………………．14 2．6叶的卷曲…………………………………………………．．14 大白菜BrTCP基因的分离和表达载体的构建……………………………16 1材料与方法…………………………………………………．．16 1．1试验材料…………………………………………………．．16 青岛农业大学硕士论文 目录 1．2试验方法…．．：……………………………．，………………．17 1．2．1 PeR引物设计………………一…．．；……………i…………17 Kit方法)………．．………………18 1．2．2大白菜总RNA的提取(TriZol 1．2．3 RNA甲醛变性胶电泳检测……………………………………．．18 1．2．5目的基因的获得……………………………………………20 1．2．6连接反应…………………………………………………20 1．2．7大肠杆菌感受态细胞的制备和转化………………………………21 1．2．8质粒的提取：……………………………………………．．22 1．2．9质粒DNA的酶切鉴定…………………………………………23 1．2．10序列测定………………………………………………．．23 1．2．11 BrTCP基因表达载体的构建…………………………………．．23 2结果与分析………………………………………………一．…25 2．1大白菜福山包头总RNA质量的检测………………………………．．25 2．2 2．3 2．4序列分析及同源性比较…………………………………………26 2．5BrTCP基因表达载体的构建…………．…………………………．28 2．6大白菜BrTCP基因序列特征分析…………………………………．29 2．7BrTCP蛋白质的二级结构预测……………………………………29 2．8BrTCP氨基酸序列同源性分析……………………………………29 2．9 3讨论………………………………………………………．．3l 根癌农杆菌介导的浸花法转化拟南芥…………………………………32 1材料与方法……………………………………