鸡输卵管特异表达载体的优化及体内表达.pdfVIP

生 物 工 程 学 报 Chin J Biotech 2008, January 25; 24(1): 137-141 Chinese Journal of Biotechnology ISSN 1000-3061 cjb@ ©2008 Institute of Microbiology, CAS CSM, All rights reserved. 研究简报 1 2 2 2 1 高 波, 孙怀昌 , 王永娟 , 房浩霞 , 宋成义 1 , 225009 2 , 225009 : 为了实现鸡输卵管特异表达载体在相应组织特异高产表达, 并简化质粒 DNA 的制备过程, 本研究在已经构建 的鸡输卵管特异表达载体 pOV1 基础上进行了优化改造, 为进一步进行重组药物蛋白的暂态表达及转基因鸡研究奠定 基础。首先用限制性内切酶将克隆在 pOV1 载体的鸡卵清蛋白基因 5′-和 3′-调控区切出, 同时克隆到切除 neo 基因及 CMV 启动子的pcDNA3.0 载体, 构建成另一输卵管特异表达载体 pOV2; 将鸡卵清蛋白基因 5′-调控区单独克隆入同样 载体, 获得第三个鸡输卵管特异表达载体pOV3 。为了检验三个输卵管表达载体驱动外源基因在鸡体内输卵管细胞中表 达的有效性和特异性, 将 LacZ 报告基因分别克隆入 pOV1 、pOV2 、pOV3 中 5-调控区的下游, 获得的重组载体 pOV1LacZ 、pOV2LacZ 和pOV3LacZ 经聚乙烯亚胺包裹后, 经翅静脉注射产蛋鸡。用RT-PCR 和酶活性检测法对LacZ 基因在载体注射鸡体内的表达进行检测, 结果显示肝、脾、肾、心等组织中无LacZ 基因的表达, 而输卵管膨大部不仅 有LacZ 基因的表达, 而且表达的重组酶能分泌到蛋清中, 雌激素注射对报告基因的表达具有促进作用, 其中pOV3LacZ 的表达水平较高。这些试验结果表明, 鸡输卵管特异表达载体pOV3 具有结构相对简单、表达水平较高、组织特异性较 好等优点, 能用于鸡输卵管生物反应器的研制。 : 鸡输卵管特异表达载体, LacZ 基因, 体内表达 Optimization and in vivo Expression of Chicken Oviduct- Specific Expression Vector 1 2 2 2 1 Bo Gao , Huaichang Sun , Yongjuan Wang , Haoxia Fang , and Chengyi Song 1 School of Veterinary Medicine, Yangzhou University, Yangzhou 225009, China 2 School of Animal Science and Technology, Yangzhou University, Yangzhou 225009, China Abstract