丹参对豚鼠耳蜗缺血再灌注损伤后细胞凋亡和Fas系统表达影响.pdf

丹参对豚鼠耳蜗缺血再灌注损伤后细胞凋亡和Fas系统表达的影响 中文摘要 目的：通过建立豚鼠耳蜗缺血再灌注损伤模型： 1．观察缺血及再灌注损伤后不同时间段豚鼠耳蜗的形态学改变 2．观察缺血及再灌注损伤后不同时间段豚鼠耳蜗Fas蛋白和Fas配体的 表达及分布情况并进行图像分析 3．观察缺血及再灌注损伤后不同时间段豚鼠耳蜗细胞凋亡的情况 4．对缺血及再灌注损伤后不同时间段豚鼠耳蜗Fas系统的表达与细胞凋 亡间的关系进行分析 5．探讨丹参对以上改变的作用 方法： 健康豚鼠72只随机分成正常组、假手术组、丹参干预假手术组、模型组和 干预组(丹参注射液术前腹腔注射，每天1次共7天)，后两组各在缺血30分钟、 再灌注6小时及再灌注24小时取材。每组8只。 耳蜗缺血再灌注模型的建立方法：豚鼠麻醉后颈前正中切口依次分离皮下组 织、肌肉，暴露双侧椎动脉和--俱fJ颈总动脉，灼断双侧椎动脉并用微动脉夹夹闭 颈总动脉建立耳蜗缺血模型，打开微动脉夹使颈总动脉血流复通建立再灌注模 型，假手术组仅暴露血管。取豚鼠耳蜗制作石蜡切片，用组织化学方法观察缺血 及再灌注不同时间点耳蜗各部位的组织学改变，用免疫组织化学法(SP)观察 Fas系统的表达和分布，用TUNEL法观察细胞凋亡的情况，并与丹参干预后进行 比较。实验数据运用SPSSl3．0统计软件进行方差分析，用LSD检验比较组间差 异，P0．05为有统计学意义。 结果： 脏染色见正常组、假手术组和丹参干预假手术组Corti器毛细胞无损伤， 血管纹清晰；缺血及再灌注各组可见毛细胞变形、缺损，螺旋神经节细胞减少， 血管纹变薄，以再灌注24h改变最明显；丹参干预组各组改变明显减轻。免疫组 织化学染色见正常组、假手术组和丹参干预假手术组耳蜗血管纹、螺旋神经节、 3 Corti器Fas和FasL表达为弱阳性，缺血及再灌注各组表达明显增强，丹参干 预后表达减弱。TUNEL法显示正常组、假手术组和丹参干预假手术组耳蜗各部位 没有或仅有个别部位出现细胞凋亡，缺血及再灌注各组耳蜗凋亡细胞明显增多， 丹参干预后凋亡细胞减少。 结论： 通过微动脉夹及烧灼法能够建立豚鼠耳蜗缺血再灌注损伤模型。缺血再灌注 可致豚鼠耳蜗损伤，组织形态学改变表现为毛细胞变形、缺损，血管纹变薄，螺 旋神经节细胞减少等。正常组豚鼠耳蜗各部位Fas和FasL为弱阳性表达，无或 罕有凋亡细胞。缺血及再灌注各组Fas和FasL表达增强，凋亡细胞增多，丹参 干预后皆有所下降。以上结果提示细胞凋亡是耳蜗缺血再灌组损伤的～种细胞损 伤形式，丹参可能通过抑制Fas系统介导的细胞凋亡而对缺血再灌注损伤后的耳 蜗起保护作用。 关键词：豚鼠耳蜗缺血再灌注损伤Fas蛋白FasL细胞凋亡丹参 4 TheEffectsofSalviaMiitiorrhizaonCell andthe ofFas ApoptosisExpression inCochlearofGuineaAfter System Pigs lschemia-reperfusionInjury Abstract theanimal of in of establish modelischemia cochlea Objective：To reperfusioninjury guineapigs： 1．Toobservethe of incochlearafterischemia in changemorphology reperfusion differenttime． 2．To