Mfn2表达对高脂诱导的胰岛素抵抗大鼠肝脏糖、脂代谢的影响及其机制的研究.pdf

中文摘要 Mfn2表达对高脂诱导的胰岛素抵抗大鼠肝脏糖、脂代谢的影响 及机制研究 摘 要 近年来，2型糖尿病的患病率有急剧增加的趋势，据估计到2025年， 患糖尿病的人数将超过3亿。胰岛素抵抗是肥胖和2型糖尿病早期重要的 发病机制，已经成为重要公众健康问题。胰岛素抵抗状态下存在糖类和脂 肪代谢效率降低。线粒体是机体能量代谢和供给的核心细胞器，在代谢性 疾病中的作用不容忽视。已有研究表明线粒体功能障碍与胰岛素抵抗和2 型糖尿病的发生密切相关，可能是胰岛素抵抗的发生机制之一。线粒体功 能异常包括氧化能力的降低及ATP合成的减少，可导致脂质沉积，引起 胰岛素抵抗。 线粒体形态结构的维持在调节能量代谢中发挥重要作用。线粒体是一 种动态的细胞器，通过不断的融合和断裂过程来维持其网状结构及功能。 成及网状结构的维持。而Mfn2是哺乳动物细胞中介导线粒体融合的关键 蛋白之一。体内和体外实验模型表明生理或病理状态可导致Mfn2表达的 改变，如糖尿病、肥胖、胰岛素抵抗下调Mfn2表达，而运动和体重减轻 则上调Mfn2表达。有研究报道，下调Mfn2表达使线粒体膜电位降低、 氧耗及葡萄糖氧化能力降低，而上调Mfn2表达使线粒体膜电位增加，氧 耗及葡萄糖氧化能力增强。先前研究表明高脂饮食下调了胰岛素抵抗大鼠 骨骼肌M血2表达。 越来越多的研究表明Mfn2表达与胰岛素抵抗状态相关，但具体机制 仍不清楚。本课题通过高脂饮食喂养大鼠建立胰岛素抵抗模型，同时用饱 和脂肪酸孵育HepG2细胞建立胰岛素抵抗细胞模型，采用重组腺病毒介 导的基因转染方法上调Mfn2表达，研究Mfn2对胰岛素抵抗大鼠肝脏糖、 脂代谢的的影响，分别在动物和细胞水平探讨其改善胰岛素抵抗的具体分 子机制。 本实验内容主要包括以下四部分： 第一部分高脂诱导胰岛素抵抗发生及对肝脏Mfn2表达的影响 l 中文摘要 目的：建立高脂诱导的胰岛素抵抗动物模型，观察高脂对大鼠肝脏 Mfn2表达的影响。 g，适应 性喂养l周后，随机分为正常对照组(normaldiet，ND)12只和高脂组 0．3％， diet，HFD)72只。ND组给予基础饲料，热量组成为脂肪1 (high-fat 碳水化合物65．5％，蛋白质24．2％，总热量为348 kcal／1009；HFD组给予 高脂饲料，其热量组成为：脂肪59．8％，碳水化合物20．1％，蛋白质20．1％， 总热量为501 h(6a／r1．6 kcal／1009。所有动物自由摄食饮水，明暗周期为12 pm)，室温20℃．23。C。实验第8周末，两组分别随机选出6只进行清醒 euglycaemic 状态下高胰岛素．正葡萄糖钳夹(hyperinsulinaemicclamp)实 infusion 验，计算葡萄糖输注率(glucoserate，GIR)，评价胰岛素敏感性。 判断造模成功后，处死大鼠，留取血清及肝组织进行相关指标检测。血糖 (blood 游离脂肪酸(free fatty 三酯(triglyceride，TG)及总胆固醇(total timePCR 化分析仪测定。肝组织Mfn2mRNA及蛋白水平分别采用Real 及Westernblot方法检测。 结果： 1两组大鼠一般指标的比较